Actividad sinérgica in vitro de Benznidazol y Clomipramina sobre Trypanosoma cruzi

STRAUSS M; DA SILVA RODRÍGUEZ J; GARCÍA M; LO PRESTI MS; BAZAN C; BAEZ AL; MILER N; PAGLINI PA; JIMENEZ-KAIRUZ AF; NAKAMURA CV; RIVAROLA HW

Rosario

Jornada; XXVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2013

Sociedad Argentina de Protozoología y Enfermedades Parasitarias

Introducción: La enfermedad de Chagas es una ?enfermedad desatendida?. Benznidazol (BZ) es el fármaco de elección; pero el acceso limitado, problemas fisicoquímicos y efectos adversos, condicionan su uso. Buscando nuevos blancos terapéuticos, la enzima tripanotiona reductasa exclusiva de Kinetoplastide, es una interesante alternativa y Clomipramina (CLO) es un inhibidor directo. Dada la no disponibilidad de BZ puro y CLO neutra, se obtuvieron y purificaron a partir de comprimidos disponibles y la sal (CLO.HCl), respectivamente. Objetivo: Evaluar la citotoxicidad y mecanismo del efecto combinado (BZ+CLO) sobre la cepa Y de T. cruzi, en epimastigotes (EPI) y trypomastigotes (TRY). Metodología: Obtención de BZ: Se molieron comprimidos (Radanil®) y dispersaron en etanol (agitación/calor 30min). Se filtró y BZ se recristalizó por cambio de temperatura-solvente. Obtención de CLO: Se obtuvo por neutralización de la solución acuosa de la sal con NaOH. Se purificó por partición con 1,2 dicloroetano y posterior evaporación lenta. Ensayo de Citotoxicidad (MTT): Se aplicó la metodología Denizot (1986) sobre la línea celular LLCMK2. Se incubó 2,5.105cel/mL con BZ=62,5-1000μg/mL y CLO=25-1000μg/mL. Efecto combinado (checkerboard): Se incubaron: a) EPI=1x106epi/ml con BZ=0,56-10μg/mL y CLO=6,25-100μg/mL, b) TRY=2x107tryp/ml con BZ=0,25-4,0μg/mL y CLO=0,975-31,25μg/ mL. Se calculó el Índice de Combinación (CI> 1 antagonismo; CI= 1 aditivo; CI< 1 sinérgico) y graficó el isobolograma. Resultados: Se obtuvo BZ (98% pureza) y CLO con rendimientos >85 y >70%, respectivamente. Ambos se presentaron como cristales aciculares, estables y poco higroscópicos. BZ+CLO mostraron un comportamiento antagónico en células LLCMK2 (CI=1,26) y sinérgico en EPI (CI=0,90) y TRY (CI=0,60). El IC50 de CLO fue 7 y 24 veces menor que la concentración citotóxica sobre EPI y TRY, respectivamente. Conclusión: La asociación CLO+BZ presenta efecto sinérgico sobre la cepa Y y puede ser considerada una potencial estrategia más efectiva y segura para la farmacoterapia del Chagas.