El estrés oxidativo generado por fotoactivación de Tetraacetato de Riboflavina induce apoptosis en células de carcinoma escamoso

JUAREZ, V; SOSA, LV; LEIMGRUBER, C.; TORRES, A I; HAGGI, E; PONS, P

Mar del Plata

Congreso; LVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2013

La fotoactivación de tetraacetato de riboflavina (RTA) conduce a la generación de especies reactivas de oxígeno (ERO), por lo que podría ser aplicado en Terapia Fotodinámica (TFD). Ésta consiste en la activación de un fotosensibilizador con luz visible lo que produce la muerte celular por formación de ERO. El objetivo fue estudiar el efecto de las ERO generadas por fotoactivación de RTA en células humanas de carcinoma escamoso SCC-13. Se determinó que RTA es fotoestable y tiene capacidad de generar oxígeno singlete empleando como sonda 9,10-dimetilantraceno. Para evaluar el efecto de la TFD en células tumorales se empleó la línea SCC-13 incubadas en medio DMEM con RTA 50µM por 3h y se irradiaron con λ 444nm (4.5, 9 y 18J/cm2). Se demostró que la RTA no es citotóxica pero fotoactivada genera disminución de la viabilidad y proliferación en forma dosis de luz dependiente. Se observaron variaciones del ciclo celular con aumento en las fases S y G2/M vs control. Los estudios morfológicos ultraestructurales mostraron que las células sometidas a TFD presentan condensación de cromatina y formación de cuerpos apoptóticos. La presencia de apoptosis se corroboró por citometría de flujo con Anexina V/7AAD y técnica TUNEL. Se observó clivaje de PARP y disminución de procaspasa 3 demostrando que la apoptosis inducida es caspasa dependiente. Se determinó que la citotoxicidad de la TFD se debe al aumento de los niveles intracelulares de ERO detectados con 2,7-dihidrodicloro fluoresceína. Para comprobar la efectividad de la TFD in vivo, se aplicó RTA en epidermis hiperplásica de ratones SKH: HR1 tratados con laurilsulfato de sodio y se iluminó 18J/cm2, logrando reducción de la hiperplasia en un 49 y 44% en hembras y machos respectivamente. Estos resultados sugieren que RTA es un compuesto fotoestable y su fotoactivación genera estrés oxidativo produciendo la muerte celular por apoptosis, por lo cual podría ser un efectivo fotosensibilizador en la aplicación de TFD.