GLUTAMINA PREVIENE LA INHIBICIÓN DE LA ABSORCIÓN INTESTINAL DE CALCIO DESENCADENADA POR MENADIONA MEDIANTE BLOQUEO DEL ESTRÉS OXIDATIVO Y LA APOPTOSIS DE ENTEROCITOS

BENEDETTO M.; DIAZ DE BARBOZA, G; TOLOSA DE TALAMONI N

Buenos Aires

Congreso; Reunión Anual de AAOMM; 2012

Glutamina (GLN) es un aminoácido con propiedades antioxidantes y antiapoptóticas en diferentes tejidos expuestos a drogas pro-oxidantes. En trabajos previos de nuestro laboratorio se demostró que la administración de menadiona (MEN) disminuye la absorción intestinal de calcio mediante estrés oxidativo y muerte por apoptosis de células epiteliales duodenales. Es este trabajo, nos propusimos estudiar el posible rol protector de GLN en relación con el efecto inhibitorio causado por MEN sobre la absorción intestinal de calcio. Para ello, pollos Cobb-Harding (Gallus gallus domesticus) de 4 semanas de edad alimentados con una dieta comercial (Cargill, SACI, Córdoba) recibieron 1g de GLN/Kg de peso corporal por vía gastrointestinal y/o 2,5 μmol de MEN /Kg de peso corporal por vía intraperitoneal (60 ó 90 min. después). Se permitió la acción conjunta de ambas drogas por 30 min. Los animales controles se trataron con vehículo. La absorción intestinal de calcio se determinó mediante la técnica del asa ligada in situ empleando Ca45 como trazador. Se cuantificó el contenido de glutatión  intracelular (GSH) mediante método enzimático y en homogeneizados de mucosa duodenal se midió la actividad de las enzimas antioxidantes catalasa (CAT) y superóxido dismutasa (SOD), por métodos espectrofotométricos. Se determinó la fragmentación del ADN mediante la técnica de TUNEL y la expresión de proteínas pro y anti-apoptóticas por inmunohistoquímica empleando anticuerpos específicos. Los resultados mostraron que la administración de GLN 60 ó 90 min previos a la inyección de MEN previno la disminución de la absorción intestinal de Ca desencadenada por la quinona. El pretratamiento con GLN permitió mantener el contenido de GSH intracelular y la actividad de las enzimas SOD y CAT a valores similares a los de los controles. El incremento del 30% en el número de células TUNEL positivas desencadenado por MEN  se evitó por la administración previa de GLN en los tiempos estudiados. La determinación inmunohistoquímica de las proteínas pro-apoptóticas reveló que GLN bloquea el incremento en la expresión de citocromo c, FAS y FASL desencadenado por MEN en enterocitos. La inmunotinción para la molécula Bax no se modificó con los tratamientos de MEN ni de GLN. La expresión de las proteínas anti-apoptóticas Bcl2 y calbindina D28k disminuyó después del tratamiento con MEN. La administración previa de GLN sólo impidió la disminución de Bcl2 desencadenada por la quinona.  Los resultados expuestos anteriormente permiten concluir que GLN protege a las células epiteliales duodenales frente al estrés oxidativo desencadenado por MEN mediante preservación de las defensas antioxidantes celulares como lo indican los niveles de GSH y la actividad de SOD y CAT. Probablemente, esta defensa antioxidante trae aparejada el arresto de la apoptosis desencadenada por MEN, bloqueando la activación de las vías extrínseca (mediada por Fas-FasL) e intrínseca (a través de citocromo c) y preservando la expresión de la proteína antiapoptótica Bcl2. GLN ejercería así protección de la absorción intestinal de Ca+2, mediante mantenimiento del número de enterocitos con capacidad de absorción del catión.