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Los nematodos entomopatógenos son parásitos obligados de insectos; sus bacterias simbiontes producen toxinas que ocasionan la muerte del hospedador. Por esa razón son potenciales agentes de control biológico de plagas. En la provincia de Santa Fe se realizaron prospecciones en sitios destinados a la agricultura. A partir de muestras de suelo se obtuvieron 5 aislados con características morfológicas correspondientes al género Steinernema y uno a Heterorhabditis. El objetivo del presente trabajo fue identificar a nivel específico esos aislados mediante el análisis de los segmentos de expansión D2-D3 del gen 28S rRNA. El ADN se extrajo a partir de juveniles infectivos; se realizó la amplificación y secuenciación de esa región. Las secuencias obtenidas fueron comparadas con otras disponibles en el GenBank y se evaluaron las relaciones filogenéticas en base al análisis de Neigbour Joining y Maximum Likelihood. Dos de los aislados provenientes de las localidades de Cabal y Colonia Campo del Medio se agruparon con secuencias conocidas de S. diaprepesi; individuos de Cululú, Esperanza y Videla se unieron con S. rarum mientras que el aislado de Saladero Mariano Cabal lo hizo con H. bacteriophora. En todos los casos, se obtuvieron porcentajes de similitud genética que oscilaron entre el 99-100% con respecto a las secuencias publicadas en GenBank. Los resultados revelan que se amplía la distribución de estas especies en Argentina; en el caso particular de S. diaprepesi, constituyen nuevos registros para este organismo que recientemente fue citado por primera vez en nuestro país.