Utilización de muestras de sangre adsorbidas en papel para la detección simultánea de ácidos nucleicos de roedores reservorios y virus infectantes.

MARTIN ML; MUZULIN P, GONZÁLEZ ITTIG R, LEVIS S, CALDERÓN G.

La Paz

Congreso; IV Congreso Latinoamericano y VIII Congreso Boliviano de Mastozoologia; 2018

Red Boliviana de Mastozoología

El estudio de los roedores reservorios de enfermedades virales humanas es de mucha importancia en la salud pública ya que contribuye a la vigilancia ecoepidemiologica y representa un instrumento muy útil para reconocer y reducir el impacto de estas zoonosis. La obtención, conservación y traslado de muestras e implica una logística compleja y onerosa. La incorporación de tarjetas de papel FTA © Whatman, que permiten la conservación a temperatura ambiente de ácidos nucleicos podría constituir una herramienta útil para la conservación y el transporte de muestras. El objetivo de este trabajo fue evaluar si la cantidad de ácidos nucleicos extraídos de la sangre adsorbida a las tarjetas FTA resulta suficiente para su amplificación y posterior secuenciación. Se utilizaron muestras de sangre entera de roedores positivos para virus Junín, obtenidas con anterioridad y se adsorbieron en las tarjetas FTA. El RNA viral fue extraído utilizando el Kit Qiamp Viral Mini Kit (Qiagen) y el ADN utilizando el kit comercial DNeasy Blood and Tissue (Qiagen). Se amplificaron por PCR, el gen mitocondrial citocromo b para la identificación molecular del reservorio y un fragmento de la nucleoproteina viral para la detección del virus. Los productos amplificados se secuenciaron en el equipo 3100- Avant Genetic Analyzer (Applied Biosystems). Los resultados mostraron que la cantidad de acidos nucleicos recuperados de las tarjetas FTA resulta suficiente para identificar molecularmente al Virus Junin como así también a la especie de roedores reservorio del mismo. La implementación de esta metodología por los diferentes grupos de trabajo contribuirá positivamente a la realización de estudios colaborativos dada la simplicidad de obtención, conservación y envío de las muestras con independencia de cadenas de frío.