Análisis de Fármacos en Peces por Uhplc-MS/MS: Estudios a Campo y Laboratorio

VALDÉS M.E.; BISTONI M.A; HUERTA B; RODRÍGUEZ-MOZAZ S; BARCELÓ D; WUNDERLIN D.A

Los Cocos, Córdoba

Congreso; II° Congreso Argentino de Espectrometría de Masas (CAEM); 2014

SAEM

Los fármacos son contaminantes emergentes de creciente preocupación, debido a que, si bien se los detecta en el orden de trazas en el ambiente (agua superficial, agua subterránea, sedimentos y biota), están diseñados para tener un efecto biológico aun en bajas dosis. Recientemente se publicó la presencia de fármacos en el Río Suquía, dentro de los cuales carbamazepina, atenolol y diclofenac fueron los más frecuentemente detectados aguas abajo de la descarga de la EDAR de Córdoba1. Los objetivos del presente trabajo fueron: analizar la presencia de fármacos en peces colectados en el Río Suquía, aguas abajo de la EDAR (35 y 70km), y analizar órganos de peces expuestos a fármacos en condiciones de laboratorio. El primer objetivo se desarrolló aplicando una metodología ya optimizada2 en homogenatos liofilizados de Gambussia affinis y Jenynsia multidentata (pool=0,5g peso seco). Se utilizó extracción líquida a presión (ASE 350, Thermo Scientific Dionex, USA), purificación por cromatografía de permeación en gel (HPLC-DAD, Agilent 1260 infinity, USA) y análisis por cromatografía líquida de ultra-alta eficacia acoplada a espectrometría de masas en tándem con fuente de ionización electrospray (UHPLC- QTRAP hybrid triple quadrupole-linear ion trap mass spectrometer, Applied Biosystems, USA). Para el segundo objetivo se optimizó una metodología de extracción de órganos liofilizados (25 mg de hígado, intestino, músculo y branquias y 10 mg de cerebro secos), con metanol mediante ultrasonido y purificación con extracción en fase sólida3. Se utilizó el mismo método UHPLC-MS/MS. Este método se aplicó a la cuantificación de carbamazepina (CBZ) y dos metabolitos en órganos de J. multidentata expuestas a 100 µg/L de carbamazepina durante 48h. Se realizaron curvas de calibración en cada matriz analizada (0,5-100 µg/L) adicionando estándares internos y se evaluó la recuperación (n=3), límites del método analítico e interferencia de matriz. En general, para los 20 analitos estudiados, se cumplió la linealidad en el rango 0,5-1 a 50 µg/L (r>0.999) y los límites de detección oscilaron entre 0,1-10 ng/g peso seco. Se determinaron porcentajes de recuperación entre 30-80% en homogenatos y 30-150% en órganos de peces. El efecto matriz principal fue supresión iónica, siguiendo el orden intestino≈hígado>cerebro≈branquias>músculo. Cuando fue necesario, se realizaron diluciones para mejorar la detección y cuantificación. En G. affinis y J. multidentata colectadas en el Río Suquía, se detectaron 20 fármacos. El fármaco codeína alcanzo la máxima concentración (41 ng/g peso húm.), seguida de propanolol, atenolol, lorazepam, sertralina, diazepam, citalopram, salbutamol e hidroclorotiazida. En condiciones de laboratorio, se observó acumulación de CBZ y 2-hidroxiCBZ en todos los órganos analizados de J. multidentata (máx.: 701 ng/g peso húm. de CBZ en cerebro) y 10,11-epoxiCBZ (metabolito activo) en músculo y branquias.