Capacidad migratoria de macrofagos alveolares provenientes del lavado broncoalveolar de pacientes con enfermedades pulmonares intersticiales difusas

ERNST, GLENDA; JANCIC, CAROLINA; AUTERI, SANTIAGO; CARO, FABIAN; HAJOS, SILVIA; GEFFNER, JORGE; GRYNBLAT, PEDRO

Mar del Plata

Congreso; IX Congreso Sudamericano de Broncología. XXVIII Congreso Argentino de Broncoesofagología; 2012

Ministerio de Ciencia y Tecnologia de Cordoba Gobierno de Cordoba y UNC

Introducción: La celularidad del lavado broncoalveolar (BAL) es una herramienta que contribuiría al seguimiento de algunas Enfermedades Pulmonares Intersticiales Difusas (EPID). El ácido hialurónico (AH),  ha sido descripto recientemente como modulador de la respuesta inmune. Sus funciones varían de acuerdo a su tamaño: AH de alto peso molecular (AH-APM) regula la homeostasis, mientras que AH de bajo PM (AH-BPM) estimula la síntesis de citoquinas y promueve el reclutamiento celular. Anteriormente hemos reportado un aumento significativo en los niveles de AH en el BAL de pacientes con EPID. El objetivo de este trabajo fue evaluar si el AH es capaz de inducir la quimiotaxis de macrófagos alveolares y analizar la participación de  los receptores CD44 y RHAMM en este proceso. Materiales y Métodos: Se utilizaron macrófagos alveolares obtenidos a partir de muestras de BAL de pacientes con EPID (n=25) y de controles post-operatorios de estenosis de tráquea (n=13). Estos se seleccionaron por adherencia, demostrando su pureza (>85%) por citometría de flujo y microscopía confocal utilizando anticuerpos anti-HLA-DR, CD64 y CD14. Realizamos ensayos de quimiotaxis utilizando transwell, sobre los cuales se sembraron 3x105 macrófagos alveolares. Evaluamos la capacidad  migratoria de los macrófagos en respuesta a AH-APM y AH-BPM. El recuento de células migratorias se realizó por microscopia de fluorescencia y  citometría de flujo. Para evaluar el rol de CD44 y RAAHM en la migración se realizaron pre-tratamientos de los macrófagos alveolares con anticuerpos bloqueantes anti-CD44, y anti-RHAMM. Resultados: El AH-BPM indujo la quimiotaxis de los macrófagos en forma dosis dependiente, observándose una respuesta significativa en el rango de concentraciones encontrado en el BAL de pacientes con EPID (2.000-2.500 ng/ml). Por el contrario, el AH-APM no indujo respuesta alguna. A la migración de los macrófagos frente al medio de cultivo solo, se le asignó arbitrariamente el valor de 100 y la respuesta quimiotáctica frente a AH-BPM fue calculada mediante la siguiente fórmula: (N° de macrófagos migrantes frente a AH-BPM/ N° de macrófagos migrantes frente a RPMI) X100. Empleando una concentración de AH-BPM de 2.000 ng/ml se observó una migración = 208,5±36,0; p < 0,05. El pre-tratamiento con anti-CD44 inhibió la migración hacia AH-BPM, obteniéndose un valor de 135,4±8,1; p< 0,05. Por el contrario, el bloqueo con un anticuerpo anti-RHAMM no ejerció efecto inhibitorio alguno. Encontramos además que los pacientes con NSIP, Sarcoidosis y Neumonitis por Hipersensibilidad presentaron una mayor concentración de células en el BAL (0,37x106 cél/ml;  0,26x106 cél/ml;  0,40x106 cél/ml  respectivamente) vs el grupo control: 0,11x106 cél/ml;  p< 0,05. Conclusiones: AH-BPM, en concentraciones compatibles con aquellas encontradas en el BAL de pacientes con EPID induce la quimiotaxis de macrófagos alveolares, mecanismo que podría explicar, al menos parcialmente, la incrementada celularidad hallada en el BAL proveniente de estos pacientes.