Nuevas opciones terapéuticas: células estromales mesenquimales (MSCs) como vehículo de GM-CSF utilizando ARNm transcripto in vitro.

CANTERO MJ; GONZALEZ LLAMAZARES LE ; FIORE E; DOMINGUEZ L; ATORRASAGASTI C; MALVICINI M; MAZZOLINI G; GARCIA MG

Buenos Aires

Congreso; XX Congreso Argentino de Hepatología.; 2019

En los últimos años, las células estromales mesenquimales (MSCs) se han utilizado como estrategia terapéutica para diversas patologías. Estas células se caracterizan por tener una baja inmunogenicidad, además de la capacidad de llegar al tejido dañado y tumoral. Por estas características, las MSCs se utilizan como vehículo de genes terapéuticos, siendo el uso de vectores virales el método de transferencia de genes más común. Sin embargo, el uso de ARN mensajero transcripto in vitro (IVT RNAm) está cobrando interés como nueva herramienta de expresión. Por otro lado, el factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos (GM-CSF) reduce el crecimiento tumoral por su capacidad de reclutamiento de células del sistema inmune. El objetivo de este trabajo es expresar el GM-CSF en MSCs mediante IVT RNAm como posible estrategiaterapéutica para el hepatocarcinoma. El ARNm (de GM-CSF o DsRed como control) se transcribió in vitro, fue modificado para ser más estable dentro de la célula y luego se transfectó en MSCs derivadas de células perivasculares del cordón umbilical humano. La producción de GM-CSF en el sobrenadante de cultivo seevaluó mediante ELISA y la expresión de DsRed mediante microscopía de fluorescencia. Se analizaron diferentes cantidades de ARNm, y se observó que una cantidad baja de ARNm (0,2 μg/40000 células) fue suficiente para una producción de GM-CSF estable (0,15 μg/ml) hasta 72 horas después de la transfección y enlas MSC transfectadas con DsRed se observó marca fluorescente hasta 15 días después de la transfección. Dado que el uso de MSCs con fines terapéuticos se basa en su capacidad para migrar al tejido tumoral, también evaluamos su capacidad de migración (utilizando una cámara de Boyden modificada). Observamos que las MSCs modificadas con IVT ARNm presentaron la misma capacidad migratoria, en comparación con las MSCs no modificadas. Finalmente, se analizó por citometría de flujo el fenotipo de las MSCs modificadas y se observó que el porcentaje de expresión de los marcadores de superficie (CD90, CD44, CD34, CMHII, CD80 y CD86) no varió significativamente por la transfección del IVT ARNm. Estos resultados demuestran que el uso de IVT ARNm es una alternativa para la expresión de genes terapéuticos en las MSCs, permitiendo la utilización de estas células para el tratamiento del hepatocarcinoma.