INVESTIGADORES
GARCIA Mariana Gabriela
congresos y reuniones científicas
Título:
Rol del ácido hialurónico en la modulación de la resistencia a multidrogas y la migración de células tumorales.
Autor/es:
CORDO RUSSO R; GARCÍA MG; ALANIZ LD; BLANCO G; ALVAREZ E; HAJOS S
Lugar:
Buenos Aires, Argentina
Reunión:
Simposio; Simposio de la Academia Nacional de Farmacia y Bioquímica: Avances en Inmunología Básica y Aplicada, de la mesada a la Clínica.; 2008
Resumen:
El ácido hialurónico (AH) es un glucosaminoglicano (GAG) componente de la matriz extracelular con un peso molecular de entre 105-107 Da, compuesto por unidades repetidas de disacáridos de ácido D-glucurónico y N-acetil-D-glucosamina. A pesar de la simplicidad de su estructura, el AH presenta variadas funciones tanto en procesos fisiológicos como patológicos tales como morfogénesis, remodelado tisular, inflamación y tumorigénesis. El AH puede encontrarse en su forma nativa de alto peso molecular (AH-APM ›1000 kDa) o como oligosacáridos de AH (oAH) de entre 2 y 7 unidades disacarídicas. El tamaño es un factor importante que determina sus funciones. En efecto, se han descripto propiedades angiogénicas y migratorias para la molécula de bajo PM. Además se ha demostrado que los oAH pueden competir con el polímero de alto PM por su unión al receptor CD44 e inhibir la proliferación y migración celular, modular la resistencia a multidrogas (MDR) e inducir la apoptosis de células tumorales. El AH favorece la invasión y migración de células tumorales a través de su interacción con CD44 induciendo la transducción de señales que activan entre otras proteínas a Rac-1 (Rho-like GTPasa) y TIAM1 (intercambiador de nucleótidos de guanina específico de Rac-1) conduciendo a re-arreglos en el citoesqueleto. MDR obstaculiza seriamente el tratamiento con quimioterápicos y puede estar mediada por bombas de eflujo de drogas (Pgp) o por alteraciones en la sobrevida y vías de señalización de apoptosis. Se ha observado que los o-AH serían capaces de regular la resistencia a multidrogas en células de carcinoma mamario a través de la inhibición de la vía de sobrevida PI3K/Akt.  En este trabajo se utilizaron líneas derivadas de un linfoma T murino, sensible (LBR-) o resistentes a doxorubicina (DOX) y vincristina (VCR) (LBR-D160 y LBR-V160) con el objetivo de determinar la capacidad de los distintos tipos de AH (AH nativo u oAH) de modular la resistencia a multidrogas así como también la migración tumoral. Se evaluó la capacidad apoptótica de distintos tipos de AH observando que los oAH -pero no el AH nativo- produjeron un aumento significativo en la inducción de apoptosis en las líneas tumorales resistentes LBR-D160 y LBR-V160 (13.5±3.1%; 13.5±3.4% respectivamente) con respecto a la línea sensible LBR- (4.5±2.2%). Además, los oAH lograron sensibilizar a LBR-D160 y LBR-V160 a la acción de agentes quimioterápicos como vincristina ya que el co-tratamiento de oAH con VCR produjo un aumento significativo en la inducción de apoptosis respecto de los oAH solos (LBR-D160: 38.6±2.7% vs 13.5±3.1% y LBR-V160: 30.9±1.9% vs 13.5±3.4%). Dado que distintos factores de sobrevida pueden ser modulados por AH, investigamos la vía de PI3K/Akt  a través de la producción de PIP3 y de la expresión de p-Akt por western blot así como también la expresión de survivina. Nuestros resultados muestran que oAH –pero no AH nativo- fueron capaces disminuir la producción de PIP3 así como la expresión de p-Akt en las tres líneas tumorales, mientras que el tratamiento con anti-CD44 inhibió este efecto. Además, la expresión de survivina fue disminuida sólo por oAH en LBR-V160. También se analizó la funcionalidad de la Pgp por citometría de flujo mediante acumulación de Daunorubicina, observándose que los oAH fueron capaces de bloquear la funcionalidad en LBR-D160 y LBR-V160 a través de CD44. Además, se analizó la migración de las líneas tumorales hacia gradientes de AH in vitro observando que las distintas líneas presentaron distinta capacidad migratoria siendo LBR-D160 la que migró más eficientemente. Cuando se analizó la expresión de TIAM1 por western blot sobre extractos de membranas celulares se observó mayor expresión en LBR-D160 la cual aumentó al tratar las células con AH, indicando que AH indujo la activación de TIAM1. Esto se corroboró por microscopía de fluorescencia utilizando células transfectadas con TIAM1 asociada a la expresión de la proteína verde de fluorescencia. También fue analizada la vía de señalización PI3K/Akt involucrada en la activación de TIAM1. Se observó por western blot que el tratamiento con AH indujo un aumento significativo en la traslocación de PI3K a la membrana y aumento de la fosforilación de Akt, eventos que indican la activación de esta vía. Se concluye que los oAH serían capaces de modular MDR en células linfoides por inhibición de la vía de PI3K/Akt así como también por disminución de la actividad de Pgp, sugiriendo que serían útiles en combinación con las terapias convencionales en el tratamiento de tumores linfoides. Por otra parte, el AH induce la migración de las células tumorales a través de la activación de TIAM1, mediado además por PI3K/Akt. El conocimiento de estos mecanismos constituye un avance que podría ser empleado en los tratamientos contra el cáncer en patologías hematológicas.