Caracterización de la migración e interacción de las células estromales mesenquimales humanas con el HCC.

BAYO J ; REAL A; FIORE EJ; MALVICINI M; BOLONTRADE MF; ANDRIANI O; BIZAMA C; FRESNO C; PODHAJCER O; FERNANDEZ E; GIDEKEL M; GARCIA MG; MAZZOLINI G

Simposio; Simposio Internacional Programa RAICES- Red de Científicos Argentinos en el Noreste de EE.UU, ?Ganando la guerra contra el cáncer?; 2016

El tratamiento del hepatocarcinoma (HCC) avanzado es un problema no resuelto. En este contexto, la utilización de células mesenquimales estromales (MSC) como vehículos celulares emerge como alternativa promisoria. El HCC produce factores solubles capaces de reclutar MSC. Una vez reclutadas, las MSC podrían intercambiar señales con el microambiente tumoral. Nuestro objetivo fue estudiar la interrelación entre las MSC y el HCC. Las MSC mostraron una mayor capacidad migratoria in vitro hacia medios condicionados (MC) derivados de tumores de pacientes o desarrollados en ratones, en comparación con los derivados de tejidos adyacentes (hígados con fibrosis/cirrosis). Los ensayos de migración in vivo (Fluoresence imaging y microscopía de fluorescencia) mostraron un mayor reclutamiento de las MSC hacia el hígado y al tumor en animales con HCC intrahepático (IH) y fibrosis subyacente en comparación con los controles (sano, tumor IH y solo fibrosis). Los patrones de citocinas en los MC analizados mediante arreglos de anticuerpo mostraron la presencia de GRO, MCP-1 e IL-8. Ensayos de neutralización (anticuerpos) y de silenciamiento (siRNA o shRNA) validaron estas vías como ejes quimiotácticos. La pre-estimulación de las MSC con MC derivados de tumores (MSCe) incrementó su respuesta quimiotáctica. Ensayos de microarreglos, mostraron la modulación de numerosos genes en las MSCe, encontrándose 46 genes relacionados con la migración y destacándose genes relacionados con el eje quimiotáctico AMF/AMFR (factor de motilidad autocrina y su receptor). Mediante western blot se demostró la presencia de AMF en los MC derivados de HCC. Ensayos de neutralización con anticuerpos validaron esta vía como eje quimiotáctico de las MSC. Más aun, MSC estimuladas con AMF incrementaron su capacidad migratoria tanto in vitro como in vivo hacia el HCC. Análisis de los MC de las MSCe con array de anticuerpos mostraron un incremento en la expresión de CPG-2 e IL-8 resultando en un incremento en la capacidad de inducir quimiotaxis de fibroblastos, PBMNC y células endoteliales. Lo cual fue verificado mediante ensayos de neutralización con anticuerpos. Nuestros resultados sugieren que los factores expresados en el HCC inducen el reclutamiento de las MSC el cual puede potenciarse con la estimulación con AMF. Además, estos factores inducen cambios en la expresión de genes y producción de citocinas mostrando un complejo proceso de interrelación entre las MSC y el microambiente tumoral.