La ausencia de SPARC (Secreted Protein, Acidic and Rich in Cysteine) atenua el desarrollo de fibrosis hepática en ratones.

ATORRASAGASTI C; PEIXOTO E; AQUINO JB; KIPPES N; MALVICINI M; ALANIZ L; GARCÍA MG; PICCIONI F; FIORE E; BAYO J; GURUCEAGA E; CORRALES F; PODHAJCER O; MAZZOLINI G

Congreso; XVII Congreso Argentino de Hepatología; 2013

Introducción: SPARC es una glicoproteína de la matriz extracelular (ME) implicada en diversos procesos biológicos. La expresión de SPARC se encuentra incrementada en hígados con fibrosis avanzada, tanto en muestras de pacientes como en la fibrosis experimental. La reducción en la expresión de SPARC hepático resulta en una reducción significativa en el grado de fibrosis generado con el tóxico tioacetamida. En este trabajo estudiamos los mecanismos subyacentes a este efecto. Objetivo: El objetivo es dilucidar, a través del análisis de los cambios en la expresión génica hepática, los mecanismos involucrados en el efecto hepatoprotector que se genera en ausencia de SPARC. Materiales y Métodos: Se desarrolló un modelo de fibrosis hepática avanzada en ratones SPARC wt (SPARC +/+) y SPARC knock-out (SPARC-/-) administrando de forma crónica TAA (tioacetamida). Se cuantificó el grado de fibrosis y la actividad necroinflamatoria. Los depósitos de colágeno fibrilar y ácido hialuronico (AH) se estudiaron por tinción de Rojo Sirio y por histoquímica, respectivamente. El infiltrado de células CD4+ se cuantificó por immunohistoquimica. El perfil de expresión hepático fue analizado en ratones SPARC-/- y SPARC+/+ utilizando un array Affymetrix Mouse Gene ST 1.0. Con los resultados obtenidos se realizó un análisis de las redes de interacción con el programa IPA (Ingenuity Pathway Analysis). Los genes seleccionados se validaron por PCR en tiempo real (qPCR). Se realizaron estudios de migración in vitro en cámara de tipo Boyden. Resultados: En ratones SPARC-/- el desarrollo de fibrosis inducida por TAA es significativamente menor que en ratones SPARC+/+, observándose una disminución en los depósitos y estado de madurez de las fibras de colágeno, así como también en los niveles de AH. Los ratones SPARC-/- presentaron una reducción del infiltrado inflamatorio de células CD4+. El patrón de expresión de genes en hígados de animales SPARC+/+ y SPARC-/- sin tratar con TAA mostró 139 genes sobre-expresados y 155 inhibidos en los ratones SPARC-/-. Entre ellos se destaca la inhibición de CCL19 (fold change: -1.544). Además, la capacidad de migración de esplenocitos hacia la quimiocina CCL19 fue menor para esplenocitos provenientes de ratones SPARC-/- que para los de ratones SPARC+/+. En el caso de los ratones SPARC+/+ y SPARC-/- tratados con TAA durante 10 semanas, las comparaciones presentaron 281 genes sobreexpresados y 211 genes inhibidos en los ratones SPARC-/-, frente a SPARC+/+. El análisis mediante IPA mostró cambios en la expresión de genes involucrados en mecanismosde reparación de ADN (ej. ATM y BRCA1), y en genes involucrados en procesos de detoxificación (ej. ABCC4). Conclusiones: La ausencia de SPARC desempeña un papel protector frente al estímulo fibrogénico. Postulamos como mecanismos subyacentes a este efecto la disminución de la capacidad quimiotática de linfocitos y la sobre-expresión de genes involucrados procesos de reparación del ADN y detoxificación.