El papel de SPARC (proteína secretada, acídica y rica en cisteínas) en la fibrosis hepática. Efectos biológicos in vivo e in vitro.

ATORRASAGASTI C; AQUINO JB; MALVICINI M; ALANIZ L; GARCÍA MG; SILVA M; PODHAJCER O; MAZZOLINI G

Buenos Aires

Congreso; XVI Congreso Argentino de Hepatología.; 2011

La fibrosis hepática se caracteriza por una excesiva acumulación de componentes de la matriz extracelular (MEC) y cambios en las interacciones celulares que conducen a una distorsión del parénquima hepático. SPARC (proteína secretada, acídica y rica en cisteínas) es una glicoproteína de la MEC con diversas funciones biológicas que se encuentra sobreexpresada en hígados con cirrosis y en células estrelladas hepáticas (CEH), células claves en la fibrosis. Su papel biológico se relaciona con la remodelación tisular, migración celular y adhesión. Hemos observado que la transferencia génica mediada por adenovirus de una secuencia antisentido para SPARC fue capaz de atenuar el proceso necroinflamatorio y disminuir la fibrosis en un modelo de intoxicación con TAA (tioacetamida) en ratas. El objetivo fue estudiar el papel de SPARC en el desarrollo de la fibrosis hepática utilizando ratones knock-out para SPARC (null) y explorar in vitro en CEH los mecanismos de atenuación de la fibrosis al inhibir SPARC. Se desarrolló fibrosis por administración crónica de TAA y por ligadura del conducto colédoco. Se evaluó el grado de fibrosis y la actividad necroinflamatoria. Se cuantificaron los depósitos y el estado de maduración de las fibras de colágeno por tinción de rojo sirio. Se evaluó la activación de las CEH por inmunohistoquimica de actina de músculo liso. Por PCR en tiempo real (qPCR) se estudió la expresión de colágeno y TGF-β1. Para los estudios en CEH se utilizaron líneas celulares y cultivo primario de rata. La expresión de SPARC fue evaluada por qPCR e inmunofluorescencia (IF). Se utilizó ARN de interferencia para inhibir la proteína. Se estudió la expresión de colágeno y de TGF-β1 por ELISA y qPCR. Se evaluó la migración en cámara transwell. El desarrollo de fibrosis induce la expresión de SPARC. Los ratones SPARC null presentaron una significativa atenuación del desarrollo de fibrosis. Se observó disminución en los depósitos de colágeno (2,06±0,2 vs 4,37±0,8; null vs wt), en la actividad necro-inflamatoria (índice de Knodell: 13,25±1,2 vs. 7,33±1,5; wt vs. null) y en la transdiferenciación in vivo de las CEH hacia un fenotipo activado (0,11±0,01 vs. 0,45±0,02; null vs wt). Se observó disminución en la expresión de colágeno y se detectaron fibras de colágeno finas e inmaduras. Coincidentemente se observó disminución en la expresión y en los niveles sistémicos de TGF‐β1 en ratones (489,1±59 vs. 936±83 pg/ml, null vs wt). Con el objetivo de dilucidar los mecanismos celulares relacionados con los efectos alcanzados se inhibió la expresión de SPARC en CEH in vitro y se observó reducción de diferentes mecanismos fibróticos como inhibición de la migración celular en respuesta a estímulos quimiotácticos, disminución de la síntesis de colágeno y la producción de TGF‐β1. En éste trabajo se presentan evidencias que demuestran un papel central de SPARC en fibrosis hepática, identificando a SPARC como un blanco potencial para el tratamiento de esta patología.