INVESTIGADORES
GIL Jose Fernando
congresos y reuniones científicas
Título:
Estrategias para el diagnóstico de leishmaniasis tegumentaria americana (LTA) por PCR en el norte de Salta
Autor/es:
HOYOS, C; JUAREZ, M; BARROSO, P; BRACAMONTE, ME; PORTELLA, S; GIL, JF; NASSER, JR; KROLEWIECKI, AJ; RUYBAL, P; MARCO, JD
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; X Congreso de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 2014
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Protozoología
Resumen:
La LTA es una enfermedad parasitaria endémica en norte de la provincia de Salta, causada principalmente por Leishmania (Viannia) braziliensis. Los métodos de diagnóstico directo actuales tienen una sensibilidad relativamente baja. En este trabajo se evaluaron 3 métodos de la obtención de ADN de las lesiones de pacientes, para mejorar el desempeño diagnóstico de métodos basados en PCR. Primero se comparó la capacidad de elusión de material biológico de tres soluciones, solución salina balanceada - Prolina (PBSS), buffer de lisis (BL) y solución fisiológica (SF). En una segunda fase, se compararon las capacidades de extracción de palillos e hisopos de algodón obtenidos delas lesiones. Los templados de ADN se obtuvieron siguiendo el método descripto por Higuchi (1989) y se normatizaron las condiciones de ciclado para la amplificación de un fragmento de 700 pb del minicirculo de Leishmania sp. por PCR. Para la primera etapa se obtuvo material biológico de 16 pacientes, de los cuales en 12 se observaron amastigotes en frotis. Se obtuvo la amplificación en el 66, 75 y 66% de las muestras procesadas en PBSS, BL y SF, respectivamente. Sin embargo, se obtuvieron bandas de mayor intensidad en material procesado con SF. En la segunda fase se utilizó SF para extraer 21 muestras, todas de pacientes con presencia de amastigotes. Se obtuvo amplificación en 70 y 81,8% de las muestras obtenidas con palillos o hisopos respectivamente que en conjunto representa un 76% de amplificación. Además, en estas últimas muestras, se logró observar la banda esperada, hasta en una dilución 1/600. La aplicación de estas estrategias de toma de muestra posibilita la amplificación eficiente en templados diluidos de ADN de lesiones. Es necesario evaluar el desempeño diagnóstico de las PCRs, evaluar nuevos primers, y condiciones que permitan la detección y tipificación de Leishmania spp., en muestras de pacientes que generalmente presentan baja carga parasitaria en sus lesiones.