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La bursitis infecciosa (IBD) es una enfermedad aguda muy contagiosa que causa inmunosupresión y mortalidad en pollos jóvenes, generando importantes pérdidas económicas en la industria avícola. Su agente etiológico, el virus de la bursitis infecciosa (IBDV), produce destrucción de los linfocitos B que maduran en la bolsa de Fabricio de las aves. El control de la enfermedad se realiza principalmente por administración de vacunas basadas en cepas virales atenuadas, que si bien inducen una respuesta de anticuerpos neutralizantes, generan lesiones en la bolsa interfiriendo en la respuesta a otras vacunas y/o favoreciendo infecciones por otros patógenos. En este contexto, el desarrollo de nuevas vacunas seguras y efectivas resulta prioritario para la prevención de IBDV. El objetivo de este trabajo fue obtener y evaluar un nuevo inmunógeno basado en ADN, para la expresión in vivo de la proteína VP2 de IBDV, antígeno inductor de anticuerpos neutralizantes en el hospedador. Para ello, se extrajo el ARN viral a partir de una alícuota de una vacuna comercial de IBDV del laboratorio Nobilis (cepa D78), utilizando el reactivo de Trizol (Invitrogen). Luego se realizó la amplificación de la secuencia nucleotídica codificante de la proteína VP2 mediante una reacción de RT-PCR utilizando el kit One Step RT-PCR de QIAGEN y oligonucleótidos específicos diseñados para tal fin. El producto de amplificación, de 1300 pb, se clonó en el vector pGEMT-Easy (Promega) y luego se subclonó en los sitios NheI y NotI del plásmido pXL (gentilmente cedido por el Dr. Saelens). En el vector obtenido, denominado pXL-VP2, se corroboró la identidad del inserto por secuenciación y la expresión de la proteína heteróloga mediante ensayos de Western blot utilizando extractos de células transfectadas con este plásmido y un suero de conejo con reactividad específica. Para evaluar la capacidad inmunogénica del pXL-VP2, grupos de cuatro ratones (cepa BALB/c, hembra de 7 semanas), se inmunizaron cada 21 días, por vía intramuscular, con tres dosis de 100 μg del plásmido pXL-VP2 o pXL (grupo control). A lo largo del experimento se realizaron sangrías exploratorias. Los sueros obtenidos de un mismo grupo experimental y sangría se agruparon en pools para analizar la presencia de anticuerpos neutralizantes de IBDV por la técnica de dilución límite. Tanto los sueros preinmunes como los de los ratones vacunados con el plásmido pXL no presentaron actividad neutralizante específica, a diferencia de los sueros de los ratones inmunizados con pXL-VP2 cuyos títulos neutralizantes de IBDV fueron de 4, 128 y 1024 luego de una, dos y tres dosis, respectivamente. En este trabajo se logró obtener, caracterizar y evaluar en el modelo murino, la capacidad inmunogénica de una vacuna a ADN para la expresión in vivo de la proteína VP2 de IBDV. A futuro se evaluará la inmunogenicidad y la eficacia de pXL-VP2 mediante vacunación y desafío de pollos libres de patógenos específicos.

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