CLONADO Y SECUENCIAMIENTO DEL GEN COMPLETO DE LA NUCLEOPROTEINA (NP) DE CEPAS VACUNALES Y SALVAJES ARGENTINAS DEL VIRUS DISTEMPER CANINO

GALLO CALDERÓN MARINA; ROMANUTTI CARINA; KELLER LETICIA; MATTION NORA; LA TORRE JOSE

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; XV Congreso Nacional de AVEACA; 2015

Asociación de Veterinarios Especializados en Animales de Compañía de Argentina

Introducción: El Virus Distemper Canino (VDC) conocido como Moquillo, es un miembro del género Morbillivirus, familia Paramyxoviridae, y es el agente causal de una enfermedad sistémica y por lo general fatal, altamente contagiosa, que afecta a cánidos domésticos y salvajes. Las vacunas a virus vivo modificadas desarrolladas en los 60s lograron controlar la enfermedad, pero recientemente se han registrado a nivel mundial y en nuestro país, un aumento de animales con diagnostico positivo de VDC aún estando vacunados. Estos casos, estarían relacionados con modificaciones genéticas y antigénicas de los virus de campo, ocurridas desde el desarrollo de las vacunas. Datos inmunológicos y moleculares de nuestro laboratorio e internacionales, demostraron que el gen de la Hemaglutinina (H) es la región del genoma viral que presenta mayor variabilidad.En el ICT Milstein se realiza desde hace mas de 10 años, el diagnóstico molecular del VDC, entre otros patógenos caninos, el cual consiste en una amplificación por RT-PCR de un fragmento del gen de la Nucleoproteína (NP) a partir de una muestra de sangre coagulada del perro sospechado de infección. Es por ello que contamos en nuestro laboratorio, con el material necesario para el estudio de los genes de diferentes cepas locales de VDC.El objetivo del trabajo fue estudiar la variabilidad genética de las secuencias obtenidas de los genes completos de la NP en cepas locales de VDC y compararlas con cepas vacunales. Materiales y Métodos: A partir de muestras de sangre coagulada proveniente de animales con diagnóstico presuntivo de VDC, se extrajo el ARN con Trizol® y se amplificó por RT-PCR un fragmento de 287 pares de bases (pb) correspondiente al gen de la NP. Posteriormente, a partir de 2 muestras positivas, se amplificó el gen completo de la NP, los cuales fueron clonados en el vector pGEMT-easy y secuenciados.Resultados: En los últimos 3 años, de un total de 112 muestras recibidas en nuestro laboratorio para el diagnóstico molecular de VDC, 28 resultaron positivas para la amplificación del fragmento de la NP. De estas muestras, se seleccionaron 2 para amplificar el gen completo de la NP, el cual también fue amplificado a partir de una vacuna comercial. Los genes obtenidos fueron clonados en el vector pGEMT-easy y secuenciados.Se alinearon las secuencias deducidas de aminoácidos de la NP de cepas argentinas de VDC, junto con la cepa vacunal Onderstepoort y otras cepas salvajes internacionales. Se observó un alto grado de conservación, de más del 97% a nivel aminoacidico, entre las cepas salvajes (locales e internacionales) y con respecto a la cepa vacunal Onderstepoort. Discusión: El gen codificante para la NP, al ser altamente conservado, permitiría su utilización como inmunógeno que eventualmente generara una respuesta de anticuerpos protectiva contra los diferentes genotipos circulantes de VDC.Conclusiones: Se obtuvieron por primera vez, las secuencias completas de los genes de la NP, de cepas salvajes presentes en nuestro país. Además, el análisis molecular, permitió confirmar y extender los resultados obtenidos en otros países, que muestran el alto grado de conservación del gen de la NP, haciéndolo una región genómica de gran relevancia para el diagnóstico molecular de VDC.