Amplicones derivados del virus Herpes Simplex-1 (HSV-1) capaces de dirigir la producción in situ de partículas similares al virus de la Fiebre aftosa en células de mamífero.

ROMANUTTI CARINA; D'ANTUONO ALEJANDRA; LA TORRE JOSE; MATTION NORA

Huerta Grande, Córdoba

Congreso; XXIX REUNION CIENTIFICA ANUAL DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE VIROLOGIA; 2009

SOCEDAD ARGENTINA DE VIROLOGIA

Introducción. La Fiebre Aftosa (FA), debido a su alta contagiosidad, es considerada la enfermedad infecciosa más importante que afecta al ganado bovino, ovino, caprino y porcino. En la última década ocurrieron epizootias en diferentes países libres de FA que tuvieron como consecuencia cuantiosas pérdidas económicas. Es por ello que existe un creciente interés en desarrollar vacunas de emergencia capaces de inducir barreras tempranas de inmunidad, que permitan distinguir a un animal vacunado de uno infectado y que confieran amplio espectro de inmunidad contra diferentes tipos y subtipos virales. En los últimos años se ha prestado particular atención a vectores amplicones con capacidad de “delivery” de antígenos heterólogos. En este sentido, aquellos amplicones derivados del Herpes Simplex-1 (HSV-1) son un sistema novedoso que se caracteriza porque son fáciles de producir, es posible insertar fragmentos grandes de ADN y son capaces de estimular una respuesta inmune celular y humoral. El objetivo general del proyecto es generar prototipos vacunales basados en amplicones que induzcan una protección rápida y duradera contra la enfermedad, y que además contribuyan al entendimiento de la biología inmune de la infección causada por el VFA. En este trabajo se construyeron amplicones derivados del HSV-1 capaces de expresar las proteínas de la cápside del VFA, las cuales se ensamblan para formar diferentes subunidades virales. Metodologías y Resultados. Para generar los correspondientes stocks de amplicones encapsidados, los genes de las proteínas estructurales (P1) y las proteasas 2A y 3C del VFA cepa O1 Campos, se clonaron juntos en el vector HSV-1 (P12A3C) bajo el promotor 4/5 del HSV-1. Luego el ADN de este vector se co-transfectó en células Vero2-2 (proveen en trans el gen ICP27 de HSV-1) con el plásmido pEBHICP27 y el bácmido fHSVDpacD27. Éstos plásmidos colaboradores aportan en trans el gen ICP27 y el genoma de HSV-1 modificado (pac-, ICP27-), permitiendo el empaquetamiento del amplicón. Para evaluar si VP0, VP1 y VP3 son capaces de ensamblarse en complejos proteicos con una estructura particulada o sub-unidad, células HEK293 fueron infectadas con el amplicón HSV-P12A3C y a las 24 horas, se fraccionaron los extractos celulares totales en gradientes de sacarosa, y se analizó por ELISA la presencia de subunidades del VFA. Estos experimentos revelaron la presencia de una fracción minoritaria que posee un coeficiente de sedimentación similar a cápsides virales vacías nativas (75S) del VFA. Otra fracción bien definida, con un coeficiente de sedimentación similar a las subunidades nativas 12S, fue detectada en el tope del gradiente. Es interesante destacar que también se detectó un tercer componente, con un coeficiente de sedimentación menor al de las cápsides vacías (20S). El análisis por microscopía electrónica confirmó que el material que sedimenta como 75S corresponde efectivamente a cápsides virales vacías. Conclusiones. Se desarrollaron amplicones derivados de HSV-1 que expresan las proteínas estructurales del VFA, las cuales son capaces de ensamblarse en cápsides virales vacías, así como también en otros estructuras particuladas de menor tamaño (20S y 12S).