Efecto de diferentes concentraciones de extracto hexánico de Achyrocline satureioides sobre el crecimiento y mecanismos relacionados con la patogenicidad de Paenibacillus larvae, patógeno de Apis mellífera

PALETTI ROVEY, MF; PIMENTEL BETANCURT, DIANA; BEOLETTO, V; HUALLPA, C; CAREZZANO M. E.;; MARIOLI JM.; OLIVA, M DE LAS M

Otro; IV Reunión Conjunta De Sociedades De Biología De La República Argentina ?Nuevas Evidencias y Cambios de Paradigmas en Ciencias Biológicas?; 2020

EFECTO DE DIFERENTES CONCENTRACIONES DE EXTRACTO HEXÁNICO DE Achyrocline satureioides SOBRE EL CRECIMIENTO Y MECANISMOS RELACIONADOS CON LA PATOGENICIDAD DE Paenibacillus larvae, PATÓGENO DE Apis mellíferaPaletti Rovey MF1,3, Pimentel Betancurt DC1,3, Beoletto VG1, Huallpa C1, Marioli JM2,3, Oliva M de las M1,31Departamento de Microbiología, Fac. Cs. Exactas, Fco-Qcas y Naturales, Universidad Nacional de Río Cuarto.2 Departamento de Química, Fac. Cs. Exactas, Fco-Qcas y Naturales, Universidad Nacional de Río Cuarto.3Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET), Argentina.E-mail: mfpaletti@gmail.comAchyrocline satureioides es una especie medicinal, perenne y aromática, nativa del sudeste de América del Sur, popularmente conocida como ?Marcela? y de amplio uso en la medicina tradicional de la región del Río de la Plata. Nuestro grupo de trabajo ha estudiado la actividad antimicrobiana del extracto hexánico (EH) de esta planta sobre Paenibacillus larvae, patógeno bacteriano de larvas de abejas melíferas y agente causal de Loque Americana (LA), el cual demostró ser un efectivo inhibidor de este bacilo esporulado. El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto de distintas concentraciones de EH sobre el crecimiento de P. larvae y sobre la producción de proteasas, swimming y swarming. El EH obtenido fue obtenido por evaporación a presión reducida para eliminar el solvente y se disolvió en DMSO hasta lograr concentraciones inhibitorias (CIM) y bactericidas (CBM). Se realizaron tres curvas de crecimiento de P. larvae: control (sin EH), con adición del EH a tiempo 0 (E) y con adición de EH al final de la fase exponencial (46 h aprox.) (E*). Se evaluaron diferentes concentraciones: 0,15 g/ml (½ CIM), 0,30 g/ml (CIM), 0,75 g/ml (2 ½ CIM) y 1,17 g/ml (CBM) y se determinaron los parámetros de crecimiento:  (velocidad de crecimiento) y TD (tiempo de duplicación). Se tomaron alícuotas de las curvas de crecimiento las cuales se sembraron en placas de agar leche descremada para determinar el efecto del EH sobre la producción de proteasas. La capacidad de P. larvae de producir swimming y swarming y el efecto de la concentración sub-inhibitoria (0,15 g/ml = ½ CIM) sobre la motilidad, se determinó sembrando placas de medio MYPGP con un contenido de agar de 0,3% y 0,5%, respectivamente. Se observaron efectos inhibitorios sobre el crecimiento de P. larvae al agregar EH a concentraciones sub-inhibitorias, inhibitorias y sub-letales, independientemente de la concentración analizada y el momento de adición. La concentración bactericida produjo la muerte del microorganismo a las 5 h (curva E) y a las 70 h (curva E*). Los parámetros de crecimiento se vieron afectados a medida que aumentaba la concentración de EH, con disminución de las y aumento en los TD. La producción de proteasas disminuyó en los tratamientos E a concentraciones sub-inhibitorias e inhibitorias, mientras que en los tratamientos con concentraciones sub-letales y letales se observó mínima actividad proteasa en el tiempo 0, permaneciendo ausente en el resto de la experiencia. Cuando el EH se adicionó a las 46 h (E*), se observó disminución de la actividad proteasa a partir de las 53 h en los cultivos expuestos a una concentración sub-inhibitoria, mientras que los cultivos expuestos a concentraciones inhibitorias y mayores a ésta, presentaron ausencia de actividad a partir de las 53 h. Se determinó que la cepa estudiada no fue capaz de producir swimming y swarming. En conclusión, el EH de A. satureioides, demostró ser un inhibidor efectivo del crecimiento y de la producción de proteasas, representando una alternativa y estrategia natural para ser utilizado como potencial agente de control de LA, patología de difícil tratamiento y causante de grandes pérdidas económicas en el sector apícola.