Efecto inhibitorio del extracto hexánico de Achyrocline satureioides sobre dos nuevos aislamientos de Paenibacillus larvae.

PALETTI ROVEY, MARÍA FERNANDA; HUALLPA, CARLOS; MARIOLI JUAN MIGUEL; OLIVA MARIA DE LAS M

Jornada; XXIV Jornadas Científicas Sociedad de Biología de Córdoba; 2021

La Loque Americana (LA) es causada por Paenibacillus larvae, un bacilo Gram positivo, móvil y esporulado. Se describen 5 genotipos ERIC de los cuales, ERIC I y II son los que se aíslan en brotes de la enfermedad. La espora es la responsable de causar el daño en la larva, por lo que no existen medidas eficaces de control, ya que los antibióticos no son efectivos contra esta estructura y pueden dejar residuos en la miel y colmena. El extracto hexánico (EH) de Achyrocline satureioides, una planta medicinal nativa, demostró buena actividad antimicrobiana sobre cepas de P. larvae. El objetivo de este trabajo fue aislar e identificar cepas de P. larvae y evaluar la actividad del EH sobre éstas. A partir de un cuadro apícola con sintomatología de LA se tomaron escamas y se colocaron en agua destilada estéril. Luego se aplicó un shock térmico, se sembraron en superficie en placas con agar MYPGP suplementado con ácido nalidíxico y se incubaron a 37°C en microaerofilia durante 4 - 5 días. Para la identificación se consideraron las características culturales, morfológicas, fisiológicas y bioquímicas. Además, se realizó MALDI-TOF, identificación molecular con primers específicos PL1/PL2 y genotipificación empleando primers ERIC. Se evaluó la motilidad utilizando placas de agar MYPGP con 0,3% de agar para swimming y 0,5% de agar para swarming. Se determinó la CIM del EH mediante la técnica de difusión en disco y la técnica de microdilución en caldo. Por último, se determinó la CBM utilizando la técnica de microgota. Se observó el desarrollo de colonias claras, no pigmentadas, redondeadas, cremosas, opacas y de bordes irregulares. La tinción de Gram permitió observar bacilos Gram positivo, rectos o ligeramente curvos, individuales o en cadenas, mientras que con la tinción de verde de Malaquita se observaron esporas. Se aislaron dos cepas, denominadas P. larvae A1 (Pl A1) y P. larvae A2 (Pl A2), las cuales presentaron los siguientes resultados en la identificación bioquímica: catalasa negativo, hidrólisis de caseína y gelatina positivos, hidrólisis de almidón negativo, reducción de nitratos variable, Voges-Proskawer negativo, coincidiendo con los resultados descriptos para P. larvae. El MALDI-TOF confirmó la identificación para Pl A1 y Pl A2. La identificación molecular y genotipificación indicaron que las cepas aisladas correspondían a P. larvae genotipo ERIC I. Se observó que las cepas evaluadas no fueron capaces de producir swimming y swarming. En la técnica de difusión en disco los valores de CIM obtenidos fueron 112,5 μg/ml para Pl A1 y 225 μg/ml para Pl A2. La CIM del EH utilizando la técnica de microdilución en caldo fue de 4,68 µg/ml para ambas cepas. El EH presentó actividad bactericida con un valor de CBM de 18,75 µg/ml para Pl A1 y de 37,5 µg/ml para Pl A2. Se lograron aislar e identificar 2 cepas patógenas de P. larvae ERIC I, indicando la presencia de la enfermedad en cuadros apícolas de la zona de Mar del Plata. Por otro lado, el EH de A. satureioides demostró