Identificaci¨®n de Genes de Frutilla involucrados en la respuesta defensiva contra Colletotrichum sp.

AGÜERO T; TONELLO U; SALAZAR S; CASTAGNARO A; DIAZ RICCI JC

Tafi del Valle, Tucuman, Argentina

Jornada; XIX Jornadas Cient¨ªficas; 2002

Asociaci¨®n de Biolog¨ªa de Tucum¨¢n

La antracnosis es una enfermedad caracter¨ªstica de frutilla y constituye uno de los principales factores limitantes para su cultivo en agro-ecosistemas subtropicales. Es causada por hongos del g¨¦nero Colletotrichum (C. acutatum, C. fragariae y C. gloeosporiodes). En nuestro laboratorio se caracteriz¨® la susceptibilidad de genotipos cultivados y silvestres de frutilla frente a dos de las especies de Colletotrichum (acutatum y fragariae). Se encontr¨® que el cv ¡®Pajaro¡¯ presentaba una interacci¨®n diferencial, mientras que frente a C. fragariae mostr¨® alta resistencia (interacci¨®n de tipo incompatible asintom¨¢tica), frente a C. acutatum mostr¨® alta susceptibilidad que la condujo a la muerte (interacci¨®n de tipo compatible). Sin embargo cuando se infectaba en primer lugar con C. fragariae y posteriormente con C. acutatum las plantas de cv ¡®Pajaro¡¯ se volv¨ªan resistentes al pat¨®geno virulento. Esta ¡®protecci¨®n cruzada¡¯ podr¨ªa deberse a una respuesta tipo SAR (Systemic Acquired Resistance). El objetivo del presente trabajo es la identificaci¨®n de los genes que se expresan en estas respuestas defensivas (compatible, incompatible, tipo SAR). Los genes expresados diferencialmente fueron estudiados mediante la construcci¨®n de Genotecas de Hibridaci¨®n Substractiva (CLONTECH PCR-Select cDNA subtraction kit).El esquema experimental nos permiti¨® la construcci¨®n de 5 genotecas diferentes. En la primera los genes expresados diferencialmente en la interacci¨®n incompatible fueron substra¨ªdos de un control sin infectar (Genoteca 1), en la segunda genoteca los genes expresados en la interacci¨®n compatible fueron substra¨ªdos de un control sin infectar (Genoteca 2). La genoteca 3 contiene genes diferencialmente expresados obtenidos de la substracci¨®n entre la interacci¨®n tipo SAR y un control sin infectar. La  dos genotecas restantes corresponden a la substracci¨®n entre la interacci¨®n tipo SAR e interacci¨®n incompatible (Genoteca 4), y entre interacci¨®n tipo SAR e interacci¨®n compatible (Genoteca 5). Se extrajo RNA total de hojas de frutilla infectadas y sin infectar, y se sintetiz¨® el cDNA a partir de poly A+ RNA. Las muestras fueron digeridas con Rsa I, ligadas a adaptadores y sustra¨ªdas por hibridaci¨®n. Los fragmentos diferencialmente expresados fueron amplificados por PCR, clonados en el vector pGEM T Easy (Promega) e introducidos en la cepa DH5¦Á de E. coli. Los fragmentos clonados fueron secuenciados y comparados con secuencias conocidas (GenBank, EMBL). Estos fragmentos ser¨¢n adem¨¢s utilizados en experimentos de Northern Blots para confirmar su expresi¨®n diferencial en los diferentes tipos de interacci¨®n frente a las especies de Colletotrichum.