Accion Citotoxica del Extracto de Astragalus garbancillo sobre cultivo de células gliales.

PISTÁN M; TORRES ANA M; BUSTILLO S; CHOLICH, L

Corrientes

Jornada; XIV Jornada Internacional de Ciencia y Técnología, XII Jornada de Becarios y Tesistas.; 2019

Facultad de Odontologia-UNNE

Astragalus garbancillo es una planta tóxica hallada en el NOA y causa una enfermedad de almacenamiento lisosomal adquirida en los animales. El principal tóxico es un alcaloide indolizidínico llamado swaisonina, quien inhibe a la α-manosidasa lisosomal, provocando una alteración de la función y muerte celular. Las células gliales tienen un papel muy importante en el funcionamiento del SNC. Como consecuencia del daño neuronal, estas células responden con cambios morfológicos o funcionales. El objetivo del trabajo fue desarrollar un cultivo primario de células gliales y evaluar la citotoxicidad inducida por el extracto de A. garbancillo. Se utilizaron cerebros de ratones de la cepa CF-1 (1-3 días de vida). Las meninges fueron extraídas e inmediatamente se realizó una disociación mecánica del tejido y seguidamente se centrifugó a 1.000 rpm durante 5 minutos a 4°C. Las células se sembraron en frascos de cultivo, previamente tratados con Poly-d-lisina, en medio DMEM-F12 suplementado con 10% SFB, MEM NEAA, L-glutamina y antibióticos, incubándose en atmósfera húmeda a 37°C y 5% CO2. Al día 21 DIV, las células adheridas fueron recuperadas por tripsinización (EDTA-0,25%) y sembradas en una placa de 96 wells (3x104 cél/well). Luego de 24h, el cultivo se expuso al extracto de la planta (500 y 250 µg/ml) por 48 h. La viabilidad celular fue cuantificada por medio de la tinción con cristal violeta y la citólisis mediante la liberación al medio de la enzima citoplasmática lactato deshidrogenasa (LDH). El extracto produjo una disminución dosis dependiente en la viabilidad celular, siendo del 40% en las células expuestas a la mayor dosis. Se comprobó además que este extracto indujo daño de las membrana celulares al detectarse un incremento de la LDH, 2.5 y 12 veces más que el control con 250 µg/ml y 500 µg/ml respectivamente. Estos resultados demuestran el efecto citotóxico del extracto sobre las células gliales.