PURIFICACIÓN PARCIAL DE ENZIMAS PROTEOLÍTICAS OBTENIDAS A PARTIR DE VÍSCERAS DE MERLUZA (Merluccius hubbsi)

DANIELA LAMAS; MARÌA ISABEL YEANNES; AGUEDA MASSA

Buenos Aires

Congreso; XV Congreso Argentino de Ciencia y Tecnología de Alimentos (XV CYTAL); 2015

AATA

Las operaciones pesqueras e industriales realizadas habitualmente para la comercialización de la merluza común (Merluccius hubbsi) generan subproductos que superan el 40% del peso total de la materia prima inicial. Estos subproductos, que incluyen la cabeza, vísceras y esqueletos, son fuente de moléculas con importantes propiedades nutricionales, funcionales y bioactivas. En la actualidad, una importante línea de investigación para revalorizar estos subproductos es la extracción de enzimas proteolíticas. Dichas enzimas presentan, propiedades fisicoquímicas y catalíticas superiores comparadas con sus homólogas en mamíferos. Dichas características resultan útiles y ventajosas para distintos procesos biotecnológicos. Entre estas propiedades se pueden destacar su actividad y estabilidad a bajas temperaturas, en concentraciones salinas fluctuantes, en presencia de agentes surfactantes, oxidantes y metales pesados. La producción de proteasas marinas a escala industrial presenta algunas dificultades como el importante requerimiento de materia prima por la baja concentración de enzimas en los subproductos. Asimismo, en muchos casos es necesario eliminar sustancias que puedan inhibir la acción enzimática. En este contexto, el objetivo del presente trabajo fue extraer y purificar enzimas con actividad proteolítica de las vísceras de M. hubbsi. Los ejemplares fueron obtenidos de campañas de investigación realizadas por el INIDEP. El extracto enzimático se obtuvo por homogenización en agua destilada (1:4 p/v) y posterior centrifugación (10000g, 30 min, 4ºC). Para realizar los ensayos de purificación, se utilizó acetona en una proporción extracto crudo: acetona de 1:1 y 1:1,25. La proteína soluble de los extractos enzimáticos fue determinada por el método de Lowry (1951). La actividad proteolítica se evaluó usando azocaseína como sustrato; expresando los resultados como el ∆Abs/min/mg de proteína. Para determinar la temperatura y pH óptimo se realizó un diseño experimental acoplado a la metodología de superficie de respuesta. La actividad enzimática máxima del extracto crudo se obtuvo a pH 8 y 60 °C. Bajo estas condiciones de reacción se estudió la actividad proteolítica de todos los extractos purificados. La actividad aumentó drásticamente con el proceso de purificación parcial con acetona siendo 0,0638 ∆Abs/min/mg de proteína en el extracto crudo, y 0,3022 y 0,4356 ∆Abs/min/mg de proteína en las mezclas de extracto crudo: acetona de 1:1 y 1:1,25 respectivamente. Los resultados obtenidos sugieren que la purificación resultó apropiada, sugiriendo que la extracción de proteasas a partir de las vísceras M. hubbsi podría considerarse una alternativa válida y ecológica para revalorización los subproductos pesqueros.