INVESTIGADORES
CERUTI Julieta Maria
congresos y reuniones científicas
Título:
EFECTO DEL COACTIVADOR CBP SOBRE LA ACTIVIDAD TRANSCRIPCIONAL DEL PROMOTOR DEL GEN DE LA 5-AMINOLEVULINATO SINTETASA
Autor/es:
CERUTI, J M; VARONE, C L; CÁNEPA E T
Lugar:
Viña del Mar.Chile
Reunión:
Congreso; XXXVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación en Bioquímica y Biología Molecular (SAIB); 2000
Institución organizadora:
SAIB
Resumen:
En trabajos anteriores hemos demostrado que el cAMP posee un efecto inductor del gen de ALAS a nivel
transcripcional y que es mediado por la activación de la PKA. Por deleciones seriadas de la zona promotora,
en experimentos de transfección transiente, se mape{o la zona responsable de dicho efecto a la región entre
-156 y -38 pb. Analizando esta zona se identificaron dos sitios con alta homología a CRE ubicados en -152
y -45. Estos sitios tienen actividad funcional en respuesta a cAMP. Por otro lado hemos determinado que la
sobrexpresión de CREB posee un efecto inductor o represor de de la transcripción de ALAS dependiendo
de su estado de fosforilación. Estos efectos son específicos dado que no se observan al cotransfectar con
mutantes CREB de unión al DNA y de fosforilación. Analizamos estructural y funcionalmente los
elementos con alta homología a CRE. Mutaciones de los sitios CRE analizados en ensayos de retardo en gel
y en experimentos de transfección transiente demostraron ser responsables de la acción inductora ejercida
por el cAMP, uniendo específicamente al factor CREB. En el presente trabajo por experimentos de
transfección transiente mostramos evidencias de que el coactivador CBP media la respuesta dependiente de
cAMP, aumentando la actividad inductora de CREB en presencia de PKA cerca de dos veces. Por otro lado
demostramos que revierte el efecto represor de CREB. Estos efectos son dependientes de la actividad de
PKA, dado que la cotransfección con una mutante dominante negativa de la kinasa anula la actividad de
CBP. Además es importante la ubicación relativa al inicio de la transcripción de los sitios CRE para que se
evidencie el efecto de CBP. Los resultados muestran una función inductora de CBP sobre la expresión de
ALAS y postulamos que este efecto podría deberse al reclutamiento de factores o a su actividad
acetiltransferasa de proteínas.