EL INHIBIDOR DE QUINASAS DEPENDIENTES DE CICLINAS p19INK4d AUMENTA LA CAPACIDAD DE LAS CÉLULAS DE LEYDIG MA-10 PARA REPARAR EL DNA

MARAZITA, M; SCASSA, M; CERUTI,J; PATRIGNANI, Z; PIGNATARO O; CÁNEPA E

Mar del Plata. Argentina

Congreso; XLVIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigaciones Clínicas (SAIC); 2003

SAIC

La familia de proteínas INK4 incluye 4 polipéptidos que se unen a las quinasas CDK4/6 interrumpiendo la formación de las holoenzimas dependientes de ciclina D, previniendo la fosforilación de la proteína retinoblastoma y bloqueando así la entrada a la fase S del ciclo celular. Considerando que la p19INK4d, si bien ubicua, se expresa mayoritariamente en cerebro y testículo y habiendo analizado previamente los cambios en la expresión de p19INK4d  en células de neuroblastoma sometidas a radiación UV de 20 mJ/cm2, estudiamos el comportamiento de este gen frente al mismo daño, en células de testículo con el objetivo de analizar su posible participación en la reparación de DNA. Ensayos de Northern blot demostraron que la p19INK4d se induce de manera específica a las 12 h luego de UV en cultivos primarios de Leydig y en células MA-10, hecho que se correlaciona con el arresto en G1. Se evaluó el efecto de p19 sobre la reparación de DNA irradiado con UV en células MA-10. Por medio del ensayo HCR (host cell reactivation) observamos que la sobrexpresión de p19 mejora la capacidad de éstas células para reparar el DNA dañado por UV 80 mJ/cm2 en un 72%. Por el contrario la disminución del mRNA de p19INK4d  mediante el tratamiento con oligonucleótidos antisentido causó una marcada reducción del grado de reparación. La presencia de mimosina (bloqueante de la progresión a S) o la sobrexpresión de una CDK4 mutante sin actividad quinasa aumentó la reparación sólo un 24%. Por último, la cotransfección de las células con una CDK4 mutante incapaz de unir INK4 pero con actividad quinasa, no modificó el efecto reparador de p19INK4d. Nuestros resultados demuestran la participación de p19INK4d en la reparación del DNA sugiriendo un mecanismo independiente de su capacidad de arrestar el ciclo celular en G1.