" Adsorción de la quimera BLSOMP31 en microesferas de quitosano para administración intranasal: preparación y caracterización in vitro de la formulación

A. DIAZ; DANIELA QUINTEROS; JUAN M. LLABOT; G. GHERSI; PALMA SANTIAGO; ALLEMANDI D A.; F. A GOLDBAUM; S.M. ESTEIN

Buenos Aires

Simposio; . IV Escuela de Nanomedicinas y el IV Simposio Latinoamericano de Nanomedicinas; 2014

Nanomed

Adsorción de la quimera BLSOmp31 en microesferas de quitosano para administración intranasal: preparación y caracterización in vitro de la formulación A.G. Díaz1,5, D. Quinteros2, J. Llabot2, G. Ghersi3,4, S. Palma2, D. Allemandi2, F. A Goldbaum3,4, S.M. Estein1 (1) Laboratorio de Inmunología, Depto. de Sanidad Animal y Medicina Preventiva, CIVETAN, CONICET, Fac. Ciencias Veterinarias, UNCPBA, (2) Depto. de Farmacia. Fac. Ciencias Químicas. UNC-CONICET-UNITEFA, (3) Fundación Instituto Leloir, (4) Inmunova S.A., (5) CONICET El quitosano es un polisacárido natural, degradable, biocompatible y de baja toxicidad que en los últimos años se ha usado amplamente como portador de fármacos para su administración por diversas vías. Los objetivos de este trabajo consisten en la obtención y caracterización de las microesferas de quitosano (meQ) como un nuevo sistema de liberación modificada de la quimera BLSOmp31 para su administración por vía intranasal. Metodología. Las meQ fueron preparadas dispersando el polímero (0,5% p/v) en ácido acético al 0,5% con glutaraldehído al 4% con agitación continua durante 90 min a Tº ambiente. Luego se homogeneizó con Ultraturrax T 18 (6000 RPM) por 30 min y finalmente la solución fue secada por spray dried (Tº entrada 130º, % Aspiración 100, Bomba 10%, Aire de atomización 50 mm y Tº salida 76º). Una vez obtenidas, las meQ fueron adsorbidas con BLSOmp31 mediante la incubación de 1% (p/v) de meQ y 0,5% (p/v) de BLSOmp31 en buffer fosfato salino (PBS; pH 7,2) en agitación permanente (60 RPM) a 37º durante toda la noche (ON). Luego la suspensión fue centrifugada (3000 RPM por 15 min) y el pellet liofilizado. La caracterización del estado sólido se realizó por: SEM, microscopía óptica, medición del tamaño de partícula y del potencial electrocinético (potencial z). Para determinar la tasa de liberación de BLSOmp31 desde las meQ las partículas liofilizadas se resuspendieron en PBS (pH 7.2) y se agitaron (60 RPM) a 37ºC. A distintos intervalos de tiempo se centrifugó, se tomó una muestra del sobrenadante y se determinó la concentración de proteína mediante el método de BCA en microplaca (lectura a 570 nm) Resultados y Discusión. Los resultados reflejan un alto rendimiento en el proceso de obtención de las meQ (68,95%). El análisis microscópico y las microfotografías obtenidas por SEM mostraron partículas esféricas y uniformes, con un tamaño promedio de 5,37 µm ±4,3 y potencial zeta de +33,07 mV. La eficiencia de carga de BLSOmp31 sobre las meQ fue 43,4% y la Fig. 1 muestra la cinética de la liberación de la proteína desde las mismas. Estos resultados indican que el método de secado por spray es adecuado para la obtención de las microesferas de quitosano como vehículo de la proteína ya que se obtienen partículas homogéneas y con potencial zeta positivo lo que aumentaría de manera significativa el tiempo de contacto de la formulación con la mucosa intranasal con carga neta negativa. Además, BLSOmp31 pudo ser cargada sobre las meQ mediante un simple y económico procedimiento. De esta manera, la proteína se liberaría en forma controlada en el sitio de aplicación favoreciendo su adecuado procesamiento por las células del sistema inmunitario de las mucosas. Los resultados obtenidos alientan a ensayar esta formulación en el ovino como una alternativa vacunal contra la brucelosis ovina.