Identificación de proteínas secretadas por Brucella abortus por mecanismos virB-dependientes.

M. VICTORIA DELPINO; DIEGO COMERCI; M.A. WAGNER; M.A. ESCHENBRENNER; C. MUJER; RODOLFO A. UGALDE; CARLOS A. FOSSATI; V.G. DELVECCHIO; PABLO C. BALDI

Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina

Congreso; XVII Congreso Latinoamericano de Microbiología; 2004

Abstract Las bacterias del género Brucella son capaces de alterar el tráfico intracelular del fagosoma y de esta manera alcanzar su nicho de replicación en retículo endoplásmico. Los genes virB de Brucella spp. son necesarios para la supervivencia y la replicación intracelular de estas bacterias; se ha demostrado que las cepas con deleciones en estos genes no son capaces de evadir la fusión fagosoma-lisosoma y son destruidas. Los genes virB son homólogos de genes que en otras bacterias codifican sistemas de secreción tipo IV (T4SS), involucrados en la exportación de proteínas al medio extracelular o al interior de las células del hospedador. Hasta el momento no se han caracterizado en Brucella proteínas cuya secreción dependa de la expresión de genes virB. El objetivo de este estudio fue detectar proteínas extracelulares virB-dependientes, las cuales podrían mediar la alteración del tráfico intracelular del fagosoma. Para ello se cultivó en un medio semisintético B. abortus 2308 (cepa salvaje, WT) y sus mutantes isogénicas carentes de genes virB1, virB10 o virB11 funcionales. Los sobrenadantes de cultivo fueron concentrados y analizados por electroforesis bidimensional. Los spots presentes en la cepa WT pero ausentes en las mutantes virB (spots diferenciales) fueron considerados proteínas extracelulares secretadas por mecanismos virB-dependientes, por lo que se las sometió a caracterización por espectrometría de masas (MALDI-TOF) y comparación con los genomas publicados de B. melitensis y B. suis, y con el genoma aún no publicado de B. abortus, al que tenemos acceso. Fue posible identificar las siguientes proteínas: chaperona DnaK (Hsp70), coloilglicina hidrolasa (CGH), aspartato aminotransferasa, polirribonucleótido nucleotidiltransferasa, fosfoserina aminotransferasa, 6-fosfoglucolactonasa, alquil hidroperóxido reductasa, dihidrolipoamida dehidrogenasa, citosol aminopeptidasa, y proteína ligante de leucina, isoleucina, valina, treonina y alanina. Existen numerosos reportes sobre la participación de DnaK y CGH en la resistencia de otras bacterias a los mecanismos líticos del hospedador, y sobre la detección de formas extracelulares de estas proteínas. Llamativamente, se ha hallado DnaK extracelular en bacterias que también expresan un sistema T4SS (Legionella pneumophila y Helicobacter pylori). Estos resultados sugieren que DnaK, CGH, y posiblemente otras proteínas extracelulares relacionadas a la expresión de genes virB, pueden ser factores de virulencia secretados por un sistema T4SS en Brucella spp.