Reactividad cruzada entre antígenos secretados por distintas especies de alfa-protobacterias.

M. VICTORIA DELPINO; DIANA POSADAS; ANGELES ZORREGUIETA; CARLOS A. FOSSATI; PABLO C. BALDI

Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina

Congreso; XLX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2002

Abstract Brucella pertenece al grupo alfa-proteobacteria junto con Rhizobium, Ochrobactrum, Agrobacterium, Sinorhizobium y otros géneros, en muchos de los cuales se han descripto operones codificantes para mecanismos especializados en la transferencia de moléculas al espacio extracelular o a otra célula. Esas moléculas están identificadas en muchos casos, pero no en el caso de Brucella. Nos propusimos estudiar si las proteínas presentes en el sobrenadante de cultivo de bacterias relacionadas con Brucella son reconocidas por sueros de caninos y humanos brucelosos. Las bacterias se crecieron en RPMI 1640 (Gibco) suplementado con piruvato, glutamina, SO4(NH4)2, SO4Mg, SO4Fe, S2O3Na2, Glucosa y 5% caldo tripticasa soya, pH = 7,2. Los cultivos se centrifugaron y se filtraron (0,22 mm) Los sobrenadantes fueron concentrados 100 veces por liofilización.  Se evaluó por ELISA y Western blot la reactividad de los sueros patológicos (19 humanos, 20 caninos) contra estas proteínas, usando como controles sueros de caninos y humanos sanos (21 y 16, respectivamente). Por ELISA, la reactividad promedio (densidad óptica) de los sueros patológicos (humanos y caninos) frente a antígenos de O. anthropi y S. meliloti fue significativamente mayor que la de los controles normales, y lo mismo sucedió con los sueros caninos frente a los antígenos de A. tumefaciens. En cambio, las diferencias no fueron significativas frente a los sobrenadantes de R. leguminosarum debido a que varios sueros normales dieron altas reactividades. Por Western blot los sueros de pacientes brucelosos (figura) y caninos (no mostrado) reconocieron un patrón restringido de bandas (fuertes a 28 y 37 kDa, débil a 47 kDa) en los sobrenadantes de Ochrobactrum  anthropi y una única banda de 42 kDa en los de Sinorhizobium meliloti. Para confirmar si la reactividad cruzada podría deberse a proteínas secretadas por Brucella, se inmunizó un ratón con sobrenadante de cultivo de B. abortus 2308. En ELISA, el suero de ese ratón reconoció antígenos presentes en los sobrenadantes de O. anthropi,  S. meliloti y A. tumefaciens. Las lecturas (restada la reactividad del suero preinmune) fueron 0.223, 1.213 y 0.279, respectivamente. Estos resultados indican que Brucella secreta proteínas antigénicamente relacionadas con factores secretados por otras bacterias del grupo alfa-proteobacteria. Nuevos estudios revelarán si la relación antigénica se corresponde con relaciones de estructura y/o función.