EFECTOS MODULATORIOS DE LAS VESÍCULAS DE MEMBRANA EXTERNA DE BRUCELLA DURANTE LA INFECCIÓN DE MONOCITOS

POLLAK CORA; DELPINO M VICTORIA; FOSSATI CARLOS A; BALDI PABLO C

Congreso; LX REUNION ANUAL Sociedad Argentina de Inmunologia (SAI); 2012

Diversas bacterias gram negativas liberan vesículas de membrana externa (VME) que pueden contener factores de virulencia y modular la respuesta inmunológica a favor del patógeno. Previamente mostramos que la preincubación con VME de Brucella inhibe la producción de TNF-α por monocitos humanos (THP-1) en respuesta a agonistas de TLRs, pero aumenta la expresión de ICAM-1. Por ello decidimos evaluar si la preincubación de THP-1 con VME modifica su adhesión a endotelio (HMEC-1). Las VME fueron obtenidas por concentración del medio de cultivo de B. abortus. Células THP-1 fueron preincubadas o no con VME, luego marcadas con calceína y colocadas sobre monocapas de HMEC-1 previamente activadas con TNF-α. Las células no adheridas fueron removidas y se midió la fluorescencia. Las VME produjeron un aumento dosis-dependiente (p<0.001 para 10 µg/ml) en la adherencia de los monocitos. También evaluamos si la incubación de células THP-1 con VME antes o durante la infección con B. abortus aumenta la adhesión e invasión de Brucella. La preincubación con VME (10 µg/ml) produjo un aumento significativo de bacterias adheridas (9.5 veces) e internalizadas (10.8 veces) en los monocitos respecto de las células no pretratadas con VME. La coincubación, aumentó 17.8 veces la adhesión y 11.3 veces la invasión. Para evaluar el efecto de las VME sobre la producción de citoquinas en la infección, células THP-1 fueron incubadas o no con VME 4 h antes de la infección con B. abortus y se midieron las citoquinas en los sobrenadantes de cultivo a las 24 hs. La preincubación con 1 o 10 µg/ml de VME disminuyó significativamente la secreción de TNF-α (76% y 83%) y de IL-8 (13% y 68%). Los resultados sugieren que las VME liberadas por Brucella ejercen efectos que promueven la adhesión e internalización de la bacteria a monocitos, a la vez que regulan negativamente su respuesta inmune innata frente a la infección. Esto podría favorecer la persistencia de Brucella dentro de las células hospedadoras.