Presencia y posible funcionalidad de la Poli (ADP-ribosa) polimerasa en el nucleolo de Trypanosoma cruzi

MARÍA LAURA KEVORKIAN; SALOMÉ VILCHEZ LARREA; SILVIA H. FERNÁNDEZ VILLAMIL

Resistencia

Congreso; XXX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2018

SAP

La Poli (ADP-ribosa) polimerasa (PARP) de T. cruzi (TcPARP) transloca del citoplasma al n´ucleo en respuesta al daño genotoxico y adiciona cadenas de polımeros de ADP-ribosa (PAR) a proteınas aceptoras. En eucariotas superiores, PARP1 se encuentra en el nucleolo participando en la regulacion del procesamiento del rRNA y el sensado de estres por daños en el ADN. En T. cruzi aun no se ha estudiado la localizacion y el posible rol de TcPARP en este compartimento nuclear. Con el fin de identificar el dominio responsablede la acumulacion nuclear de TcPARP, se generaron epimastigotes de T. cruzi que sobreexpresan diferentes combinaciones de dominios de la enzima etiquetados con HA. Por inmuofluorescencia indirecta (IFI) se observo que la region N-terminal (NT) es suficiente para la localizacion nuclear y que la enzima completarecombinante (TcPARP-GFP) se comporta de manera equivalente a la nativa ante el estres. A nivel funcional se evaluo, por IFI, la produccion de PAR en epimastigotes transgenicos, en condiciones basales o luegode estres oxidativo, no evidenciando diferencias significativas con la cepa silvestre. A traves del estudio de curvas de crecimiento y del ciclo celular en epimastigotes sincronizados, se comprobo que la sobreexpresion de dominios de TcPARP no altera el crecimiento. A pesar de que la sobreexpresi´on de TcPARP-GFP, el dominio NT-HA y NT+WGR-HA dirigio estas prote´ınas a una localizaci´on preferentemente nucleolar, por microscopıa confocal se observo que TcPARP-GFP co-localizo con el marcador de nucleolo L1C6, mientras que las proteınas truncas generaron la deslocalizacion del marcador nucleolar al nucleo y citoplasma delparasito. La formacion de un hilo conector entre nucleos, con la presencia de material nucleolar durante la mitosis, ha sido previamente descripta. Nuestros resultados mostraron que las proteınas recombinantes se localizan en este hilo, junto con α-tubulina y, en condiciones de estres, PAR. Mediante inmunoprecipitacion seguida por espectrometrıa de masa, se encontraron numerosas proteınas ribosomales PARiladas en epimastigotes, incluso en ausencia de estres. En conclusion, se determino el dominio responsable de la localizacion de TcPARP en el nucleo y su enriquecimiento en el nucleolo. La presencia de PAR y el hallazgo de proteınas ribosomales PARiladas en el hilo conector entre nucleos podrıa sugerir una funcion de TcPARPen el nucleolo de T. cruzi.