INVESTIGADORES
VILCHEZ LARREA Salome Catalina
congresos y reuniones científicas
Título:
Disrupción del metabolismo de ADPribósidos en T. cruzi por CRISPR/Cas9: Alteración en la respuesta al daño genómico y progresión del ciclo celular.
Autor/es:
SALOMÉ VILCHEZ LARREA; MARÍA LAURA KEVORKIAN; SILVIA H. FERNÁNDEZ VILLAMIL
Lugar:
Resistencia
Reunión:
Congreso; XXX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2018
Institución organizadora:
SAP
Resumen:
La ADP-ribosilacion es una modificacion postraduccional de proteınas, partıcipe en la reparacion del daño en ADN, regulacion transcripcional y transmision de señales. En T. cruzi, este metabolismo es orquestado por la poli(ADP-ribosa)polimerasa (TcPARP) y la poli(ADP-ribosa)glicohidrolasa (TcPARG). Resultados previos mostraron que TcPARP se activa frente a agentes genotoxicos y que inhibidores de PARP-1 o PARG alteran la formacion de ADPr y la tasa de crecimiento de epimastigotes. El uso de inhibidores para el estudio de la funcion de ADPr en T. cruzi ha sido util, pero es posible que la inhibicion parcial de estas enzimas enmascare otros efectos o que algunos roles se den por interaccion directa con otras proteınas. La adaptacion del sistema CRISPR-Cas9 para tripanosom´atidos permitio la obtencion de lıneas de CL Brener transfectadas con sgRNA dirigido contra TcPARP (Cas9PARP) o TcPARG (Cas9PARG). En condiciones basales, 36 % de la poblacion del cultivo Cas9PARG mostro acumulacion ADPr nuclear, a diferencia de lo observado en la cepa silvestre (5,9 %) y Cas9Scramble (ARN gu´ıa sin blanco gen´omico) (6,6 %). Tambien se observo acumulacion del daño del ADN en la lınea Cas9PARP, indicando que la ausencia de TcPARP impide la correcta reparacion de rupturas del ADN, incluso aquellas ocasionadas por el metabolismo basal. El tratamiento con H2O2 (300 uM ? 10 min) provoc´o un aumento de ADPr en todas las lıneas, excepto en 20 % de la poblacion Cas9PARP, que demostro ser incapaz de generar estos polımeros. La acumulacion deADPr disminuyo a los 30 min post-tratamiento, menos en Cas9PARG, en la cual se mantuvo el polımero.