El dominio N-terminal de la Poli(ADP-ribosa) polimerasa de Trypanosoma cruzi es responsable de la traslocación nuclear ante el stress oxidativo

MARÍA LAURA KEVORKIAN; SALOMÉ VILCHEZ LARREA; MIRTHA M. FLAWIÁ; SILVIA H. FERNÁNDEZ VILLAMIL

Buenos Aires

Otro; XXVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2015

Sociedad Argentina de Protozoolgía

La Poli (ADP-ribosa) polimerasa (PARP) juega un papel clave en las vías de reparación del ADN frente al daño genotóxico.Cumple su función, como homodímero, a través de la síntesis de polímeros de ADP-ribosa (PAR), modificandocovalentemente diferentes proteínas. T. cruzi contiene una única PARP (TcPARP), la cual se localiza en el citoplasma. Ante elestímulo generado por estrés oxidativo, transloca al núcleo donde se evidencia la formación de PAR. A diferencia de otrosorganismos eucariotas, existen pocas descripciones de señal de localización nuclear (NLS) en tripanosomátidos. Con el finde determinar la secuencia responsable de la acumulación nuclear de TcPARP, se transfectaron epimastigotes de T. cruzicon la proteína completa o diferentes combinaciones de dominios de la enzima, etiquetados con HA. Éstos últimoscomprenden el N-Terminal (aa 1-123), WGR (aa 124-224) y región catalítica (aa 225-592). Tras realizarinmunofluorescencias en parásitos sobreexpresantes, se observó que la TcPARP completa recombinante tiene uncomportamiento equivalente al de la enzima nativa. Aquellos parásitos que sobreexpresan fragmentos que incluyen eldominio N-terminal localizan en el núcleo, mientras que las construcciones que no presentan esta región generan parásitoscon fluorescencia dispersa en el citoplasma. Este resultado fue independiente de la producción de daño genómico (H2O20.3M). De esta manera, demostramos que la secuencia comprendida en el N-terminal contiene la señal de localización yaque es la única capaz de dirigir el constructo al núcleo. Diferentes herramientas bioinformáticas postulan a TcPARP comouna enzima nucleolar, lo cual coincidiría con la localización ya reportada para la PARP-1 y PARP-2 de mamífero. A través dela realización de curvas de crecimiento, se está evaluando el efecto de la sobreexpresión de las diferentes proteínas truncassobre el crecimiento del parásito, en condiciones estándar y tras la generación de daño oxidativo.