Cuantificación de la actividad de la fosfatasa alcalina intestinal de la rata en geles de poliacrilamida

BRUN, LUCAS RICARDO MARTÍN; RIGALLI, ALFREDO; PUCHE, RODOLFO

Córdoba

Congreso; XII Congreso Científico Argentino de Estudiantes de Medicina; 2001

Sociedad Científica Argentina de Estudiantes de Medicina

La fosfatasa alcalina intestinal es una enzima involucrada en el proceso de absorción del monofluorofosfato de sodio (MFP). Esta droga es utilizado con fines terapéuticos en pacientes con osteoporosis. El calcio que habitualmente acompaña esta medicación inhibe dicha enzima produciendo aumento de la absorción intestinal de MFP. El estudio del mecanismo de acción del calcio es  desconocido. Para el estudio del mecanismo se requiere enzima purificada. En un trabajo anterior se presentó una técnica para detectar fosfatasa alcalina en geles de poliacrilamida, aprovechando su actividad catalítica sobre el glicerofosfato y la precipitación de fosfato de cobalto violeta. El objetivo de este trabajo es analizar la precisión y exactitud de la técnica de detección de fosfatasa alcalina en geles de poliacrilamida, con el fin de realizar estudios cuantitativos en geles.Todos los experimentos que se detallan a continuación se realizaron en geles de poliacrilamida al 7%. La banda de fosfato de cobalto fue digitalizada a través de un software específico. Los resultados se expresan como media±desvio standard. El producto del área de la banda por su intensidad (AxI) se encontró correlacionada con la cantidad de fosfatasa alcalina r=  0.953  p<0,01. Se determinó AxI a 6 muestras de 2 ul de la misma solución de fosfatasa alcalina, en un mismo gel 0.63±0.07,CV%=  8.7, n= 6. Se determinó AxI correspondiente a 5 muestras de 2 ul de la misma solucion de fosfatasa alcalina,  en 5 días diferentes: 0.59±0.05, CV%= 11,3%, n=5. Una misma banda fue analizada en 10 oportunidades por dos operadores diferentes. El valor de AxI no discrepó significativamente. Operador 1: 0.598 ±0.005; Operador 2:  0.608 ±0.009   p>0,05. Se concluye 1) La variable AxI permite determinar cuantitativamente la actividad de fosfatasa alcalina intestinal de rata en geles de poliacrilamida. 2) Es conveniente realizar la electroforesis de las muestras a cuantificar en un mismo gel. 3) Es conveniente que el análisis sea realizado por un solo operador.