INVESTIGADORES
BRUN Lucas Ricardo Martin
congresos y reuniones científicas
Título:
Modificación de la actividad citoplasmática de la fosfatasa alcalina intestinal de la rata en presencia de calcio
Autor/es:
BRANCE, MARÍA LORENA; BRUN, LUCAS RICARDO MARTÍN; RIGALLI, ALFREDO; PUCHE, RODOLFO
Lugar:
Rosario
Reunión:
Congreso; XXIV Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2004
Institución organizadora:
Sociedad de Biología de Rosario
Resumen:
La fosfatasa alcalina intestinal (PA) liga Ca++ con modificación de su actividad. In vitro, la actividad de la enzima purificada exhibe una respuesta bifásica: aumenta con concentraciones de Ca++ menores a 10 mM, y disminuye con concentraciones superiores a 20 mM. In vivo, hemos demostrado que el Ca++ produce aumento de la actividad de la PA en el borde en cepillo del enterocito y disminución de la misma en el citoplasma. El objetivo de este trabajo fue estudiar los cambios de la actividad enzimática citoplasmática por modificación de la concentración de calcio citosólico. Se utilizaron ratas línea “m” de 200 g. Se aislaron 3-4 cm del duodeno in situ a través dos ligaduras. En uno de sus extremos se colocó un catéter a través del cual se introdujeron 2 ml de las siguientes soluciones: Grupo A y B: NaCl 150 mM; Grupo C y D: CaCl2 50 mM + NaCl 150 mM; Grupo E: CaCl2 50 mM + NaCl 150 mM + ionóforo de Ca++ A23187 0.4 mM. A los 20 minutos se les extrajo el duodeno y las muestras se procesaron con técnicas histológicas convencionales. Los cortes histológicos de los Grupos B y D fueron expuestos a EDTA 500 mM y CaCl2 50 mM, durante 30 y 20 minutos, respectivamente. La actividad fosfatásica se puso en evidencia por incubación con 5-bromo-4-cloro-3-indolil fosfato, sustrato que produce un compuesto de color índigo. La actividad de la enzima en el citoplasma se determinó sobre las imágenes digitales de los cortes histológicos y se expresó en unidades de absorbancia. Los valores se analizaron utilizando ANOVA. Los resultados se muestran en la siguiente tabla (media±SD) y se consideraron significativas las diferencias si p<0,05. Grupo A: n=4, UAbs=0.07846±0.03288. Grupo B: n=4, UAbs=0.0052±0.008650. Grupo C: n=4, UAbs=0.03942±0.02695. Grupo D: n=4, UAbs=0.1032±0.04569. Grupo E: n=4, UAbs=0.08133±0.04588.  Conclusión: El Ca++ luminal disminuye la actividad de la PA del citosol del enterocito. La disminución de la actividad de la PA en el citoplasma del enterocito podría deberse a una disminución de la concentración de Ca++  en dicho compartimiento.