Estudio de la actividad de la fosfatasa alcalina intestinal y su localización en enterocitos de ratas, en presencia y ausencia de calcio

BRANCE, MARÍA LORENA; BRUN, LUCAS RICARDO MARTÍN; RIGALLI, ALFREDO; PUCHE, RODOLFO

Rosario

Congreso; XVI Congreso Científico Argentino de Estudiantes de Medicina; 2005

Asociación Científica Rosarina de Estudiantes de Medicina

La fosfatasa alcalina intestinal (IAP) liga calcio (Ca++) con modificación de su actividad. In vitro, la actividad de la enzima exhibe una respuesta bifásica: aumenta con [Ca++] < 10 mM, y disminuye con [Ca++] > 20 mM. El objetivo de este trabajo fue investigar los cambios de la actividad de la IAP y su localización en enterocitos de ratas, en presencia y ausencia de calcio. Se aislaron 4 cm del duodeno de ratas adultas, mediante dos ligaduras, una a nivel del píloro. En la otra se colocó un catéter, para introducir la solución a investigar. Cada rata del grupo A (n = 4)  recibió 2 ml de solución fisiológica (NaCl 9 g/l) y cada rata del grupo B (n = 4) recibió  2 ml de solución de CaCl2 50 mM. Se extrajeron muestras del contenido luminal al inicio, 10 y 20 minutos y se determinó actividad enzimática. Luego se extrajeron porciones del duodeno para realizar medición de actividad fosfatásica por histoquímica y localización por inmunohistoquímica. Cortes histológicos de los grupos A y B se incubaron con CaCl2 50 mM (Grupos C y D) a fin de aumentar la concentración del catión, durante 20 minutos. Cortes histológicos de los grupos A y B fueron expuestos a EDTA 500 mM  (Grupos E y F) a fin de producir una disminución en la concentración de calcio, durante 30 minutos. La actividad enzimática luminal (uAbs.seg-1) a lo largo del experimento fue significativamente menor para los animales tratados (grupo A: 0.00081; grupo B: 0.00026; p<0.001). Se demostró un aumento de la actividad enzimática en el ribete en cepillo del grupo B (0.1952±0.1524) respecto del grupo control (0.0997±0.0384), p<0,01. La actividad enzimática disminuyó en el citoplasma de enterocitos del grupo tratado (grupo A: 0.1052±0.0375; grupo B: 0.0396±0.0236, p<0,0001). La localización enzimática es significativamente mayor en borde en cepillo (grupo B: 0.254±0.162; grupo A: 0.286±0.127, p<0.01); respecto del citoplasma (grupo B: 0.0095±0.0012; grupo A: 0.0085±0.0009) Conclusión: El aumento de la actividad enzimática en el borde del enterocito podría deberse a su localización predominante. La disminución de la actividad enzimática podría deberse a una disminución de la concentración de Ca++  en dicho compartimiento.