Efecto del calcio sobre la actividad de la fosfatasa alcalina del citoplasma y borde en cepillo del enterocito en la rata.

BRANCE, MARÍA LORENA; BRUN, LUCAS RICARDO MARTÍN; RIGALLI, ALFREDO; PUCHE, RODOLFO

Rosario

Congreso; XXIII Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2003

Sociedad de Biología de Rosario

La fosfatasa alcalina intestinal liga cationes calcio (Ca++), fenómeno que produce la inhibición de la enzima. Este efecto depende de la concentración de Ca++ y ha sido demostrado in vitro, con enzima purificada, y en la luz intestinal de ratas in vivo. No se conoce información referente al efecto del calcio sobre la actividad de la enzima del enterocito. El objetivo de este trabajo fue investigar el efecto del Ca++ sobre la actividad de la fosfatasa alcalina del borde en cepillo, citoplasma y lumen intestinal en la rata in vivo.Se utilizaron ratas línea “m” adultas de aproximadamente 200 g, a las que se les aisló 3-4 cm del duodeno in situ a través dos ligaduras. En uno de sus extremos se colocó un catéter para introducir las soluciones. El grupo control recibió 2 ml de NaCl 9 g/L (n=4) y el grupo tratado recibió 2 ml de CaCl2 50 mM en NaCl 9 g/L (n = 4). A los 20 minutos se extrajo el duodeno y las muestras se procesaron con técnicas histológicas convencionales. Para medir la actividad tisular de la fosfatasa alcalina, los cortes histológicos se incubaron en una solución conteniendo 5-bromo-4-cloro-3-indolil fosfato, sustrato de la fosfatasa alcalina, que produce un compuesto de color índigo. La actividad en tejido se determinó sobre las imágenes digitales de los cortes histológicos y se expresó en unidades de absorbancia. En otro experimento, cortes histológicos de ratas controles fueron incubados en   CaCl2 50 mM y se determinó la actividad enzimática como se detalló anteriormente. En ausencia de calcio la actividad de la enzima no discrepó entre el borde en cepillo (0.0997±0.0384) y el citoplasma (0.105±0.037, p>0,05). El tratamiento con calcio produjo un aumento significativo de la actividad de la  enzima del borde en cepillo (0.201±0.150) respecto del citoplasma (0.040±0.024, p<0,001). La actividad de la enzima en el borde en cepillo en presencia de Ca++ es significativamente mayor que en el grupo control (p<0,01). Contrariamente, el calcio produjo una disminución de la actividad citoplasmática con respecto al control (p<0,0001). En los cortes controles incubados con Ca++ no se observó modificación de la actividad en el citoplasma (0.1082±0.08105, p>0,05) y aumentó significativamente la actividad en el borde (0.2031±0.1231, p<0,01), no discrepando este valor del hallado en los experimentos expuestos al Ca++  in vivo. Conclusiones: A) el aumento de la concentración de Ca++ en la luz duodenal aumenta la actividad en el borde en cepillo y disminuye en el citoplasma de los enterocitos, B) el aumento de la actividad en la membrana se debería a un efecto directo del Ca++  y C) la disminución de la actividad en el citoplasma no estaría mediada por un efecto directo del Ca++.