Niveles de fosfatasa alcalina intestinal de rata en experimentos de sacos evertidos a diferentes concentraciones de calcio luminales

BRUN LR; BRANCE ML; DE CANDIA LF; TRAVERSO A; RIGALLI A

Rosario

Congreso; XXIII Reunión Anual de la Asociación Argentina de Osteología y Metabolismo Mineral; 2006

Asociación Argentina de Osteología y Metabolismo Mineral

La fosfatasa alcalina intestinal (IAP) es una fosfomonoesterasa del borde en cepillo del enterocito que modifica su expresión de acuerdo a los niveles de vitamina D, desconociéndose su papel en el mecanismo de absor­ción del calcio (Ca2+). Hemos demostrado in vitro que esta enzima liga iones Ca2+, modificando en forma bifásica su actividad de acuerdo a la concentración del ca­tión. Con concentraciones menores a 10 mM, su actividad se incrementa mientras que si la concentración de Ca2+ supera 20 mM su actividad disminuye. El objetivo de este trabajo fue investigar el efecto de diferentes concentraciones luminales de Ca2+ sobre la concentración de IAP soluble luminal y plasmática. Se realizaron experimentos de sacos intestinales evertidos utilizando tres segmentos intestinales de 3 cm (a partir del píloro) de ratas hembras línea IIM/FcM sublínea “m” ayunadas peso de 180-200g. Las mucosas fueron expuestas a una solución (Smucosa) Tris 1mM, MgCl2 1mM, glucosa 160mM, Ca2+ 1 mM, 10 mM o 100 mM y la serosa a la misma solución sin Ca2+ (Sserosa). Se tomaron muestras de Smucosa a tiempo inicial y a los 10, 20, 30, 50, 65 y 80 min y de Sserosa al finalizar el experimento. Se determinó la concentración de IAP por Dot blot a los diferentes tiempos en Smucosa y por Western blot en Sserosa. Los valores se expresan como densidad óptica integrada (IOD). En ambos casos se utilizaron anticuerpos anti-IAP de rata producidos en cobayos, anticuerpos secundarios anti-IgG de cobayo conjugado con peroxidasa y 3-amino-9-etil carbazole como sustrato. Los resultados se expresan como media±SEM. La concentración de IAP en Smucosa aumentó significativamente a lo largo de los experimentos (Ca2+=1mM 4.3±0.6, Ca2+=10mM 3.8±0.7, Ca2+=100mM 1.0±0.2 Unidades IOD/min p<0.0001). Este aumento fue diferente en las concentraciones de Ca2+ investigadas (p<0.0001) siguiendo una relación inversa a la concentración luminal de Ca2+. La concentración de IAP en Sserosa estuvo en relación directa a la concentración de Ca2+ luminal (Ca2+=1mM 39.2±3.5, Ca2+=10mM 66.7±7.5, Ca2+=100mM 88.7±8.2 Unidades IOD/min p<0.0001). Se concluye que la concentración de Ca2+ luminal influye negativamente sobre la liberación de IAP hacia la luz y positivamente sobre el pasaje mucosa-serosa de IAP. Experimentos en curso intentarán explicar la relación entre la absorción de Ca2+ y esta variación en el pasaje mucosa-luz y mucosa-serosa de IAP.