INVESTIGADORES
BRUN Lucas Ricardo Martin
congresos y reuniones científicas
Título:
Modificación del peso molecular aparente de la fosfatasa alcalina intestinal de la rata por su unión al calcio.
Autor/es:
BRUN LR; RIGALLI A; PUCHE RC
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XIX Reunión Anual de la Asociación de Osteología y Metabolismo Mineral (AAOMM).; 2002
Institución organizadora:
AAOMM
Resumen:
La biodisponibilidad del monofluorofosfato aumenta por coadministración con calcio. El calcio inhibe la fosfatasa alcalina y mantiene elevada la concentración de monofluorofosfato en la luz intestinal. El ión calcio (Ca++) se liga a la fosfatasa alcalina intestinal de la rata modificando su actividad. Cuando la concentración de Ca++ es inferior a 10 mmol/litro, su presencia estimula la actividad de la enzima. Contrariamente, si la concentración de Ca++ supera ese valor disminuye la actividad de la enzima, tanto la de la soluble como aquella ligada a membranas. La electroforesis en geles de poliacrilamida de fosfatasa alcalina tratada con Ca++, mostró una disminución de la actividad de la enzima en la región correspondiente a su peso molecular y de la cantidad de Ca++ radiactivo ligado. Estos resultados indicaron que la enzima ligada al Ca++ tendría una migración diferente de la enzima libre, compatible con una modificación del peso molecular de la enzima en presencia de altas concentraciones del catión. El objetivo de este trabajo fue determinar cambios en el peso molecular aparente de la enzima por su unión con Ca++. Se realizaron dos tipos de experimentos en los que se utilizó una cantidad constante de fosfatasa alcalina altamente purificada. En un primer experimento se cromatografiaron 20 ml de la solución de enzima en presencia o ausencia de [Ca++] 100 mM. Se utilizó una columna de Sephadex G100 con la que se determinó el volumen de elusión de la enzima. El volumen de elusión hallado en ausencia de Ca++ fue 6,2±0,4 ml (n=3), mientras que en presencia de Ca++ descendió a 5,1±0,2 ml (n=3), p0,05. En un segundo experimento se incubaron 50 ml de la solución de enzima con concentraciones de Ca++ 1, 10 y100 mM con agregado de una cantidad trazadora de 45Ca. Se realizó una electroforesis en gel de poliacrilamida al 7% con gel de dos densidades (resolución y ?stacking?). Al finalizar la electroforesis se lavó el gel para eliminar el calcio radiactivo no ligado a proteínas y se determinó la radiactividad de ambas zonas del gel. El porcentaje de radioactividad en el gel de resolución fue de 100, 37 y 13% para las concentraciones 1, 10 y 100mM de calcio. En el stacking se halló la radiactividad restante, confirmando la disminución de la movilidad electroforética al aumentar la concentración de calcio. La disminución del volumen de elusión en cromatografías de exclusión molecular y el aumento de radioactividad hallada en la fracción de stacking del gel, asociados con el aumento de la concentración de Ca++, indican que el catión participa en el fenómeno de aumento del peso molecular aparente de la enzima (presumiblemente por agregación de monómeros).