Efecto de la presión con vancomicina y tigeciclina sobre la movilización de la secuencia de inserción IS256 en Staphylococcus aureus

DI GREGORIO S; HERRERA M; FERNÁNDEZ S; FAMIGLIETTI A; DI CONZA J; MOLLERACH M

Rosario

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología - XIV Congreso Argentino de Microbiología.; 2016

Asociación Argentina de Microbiología

En S. aureus, la transposición de la secuencia de inserción IS256 juega un papel importante en la formación de biofilm y la resistencia aantibióticos. En los últimos años se ha sugerido que la exposición a concentraciones sub‐inhibitorias de antibióticos podría tener un papel importante en la evolución de los genomas bacterianos.El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de la presión selectiva de antibióticos sobre la transposición de IS256 en S. aureus pertenecientes a diferentes linajes genéticos, tanto in vivo como in vitro.Se estudiaron aislamientos clínicos de S. aureus sensibles y resistentes a meticilina (SAMS y SAMR) pertenecientes a distintos linajes genéticos recuperados previo y posterior al tratamiento con vancomicina (VAN), y mutantes seleccionados in vitro con concentraciones crecientes de VAN o Tigeciclina (TIGE). Mediante Southern blot a partir de macrorestricción con SmaI/restricción con EcoRI, se realizó la detección de IS256 consonda específica; y adicionalmente la transcripción del gen de la transposasa de IS256 (tnp) se evaluó por RTqPCR. La clonalidad de las cepasparentales y mutantes se confirmó por PFGE. Al analizar el perfil de hibridación comparativo se observó un aumento en el número de copias de IS256 in vivo posterior al tratamiento con antibióticos (SAMR‐ST100‐SCCmecNT) e in vitro en los mutantes seleccionados con VAN (SAMR‐ST100‐ SCCmecNT, SAMR‐ST100‐SCCmecIV y SAMS‐ST8), y TIGE (SAMR‐ST239‐SCCmecIII).Los niveles de transcripción del gen tnp fueron significativamente diferentes en los SAMR‐ST100‐ SCCmecNT evaluados (p < 0,0001, ANOVA). El nivel de transcripción de tnp fue significativamente mayor para unos de los mutantes SAMR‐ST100‐SCCmecNT (p < 0,05, Duncan) y aunque el análisis estadístico no mostró una diferencia significativa para el aislamiento recuperado luego del tratamiento in vivo con VAN, se evidenció con clara tendencia mayores niveles de expresión de tnp en comparación con el aislamiento original. Este resultado tiene concordancia con los patrones de hibridación de Southern blot observados. Mas aún, concentraciones subinhibitorias de VAN (¼ CIM) produjeron un efectosignificativo en la expresión del gen tnp (p = 0,0335, ANOVA). Por otro lado, el nivel de expresión del gen tnp para las cepas mutantes seleccionadas in vitro con TIGE fue significativamente mayor en el caso de SAMR‐ST239 comparada con la cepa parental (p < 0,0082, test de student), y mostró mayor expresión en el caso de SAMR‐ST5 aunque no fue significativamente diferente (p = 0,2616, test de student).La presión selectiva con VAN produjo un aumento en la transposición de IS256 en cepas pertenecientes al ST100 (tanto in vivo como in vitro), y en otros linajes (ST8, in vitro). Este fenómeno ocurrió también bajo la presión selectiva de TIGE (ST239, in vitro). La presión con antibióticos podría generar rearreglos en el genoma que en última instancia impactarían sobre el fenotipo de resistencia en distintos linajes de S. aureus.