CARACTERIZACIÓN MOLECULAR DE UN AISLAMIENTO DE Staphylococcus aureus OXACILINA RESISTENTE mecA NEGATIVO

WELTMAN G; FERNÁNDEZ S; DI GREGORIO S; POWER P; ZARATE S; SMAYEVSKY J; MOLLERACH M

Buenos Aires

Congreso; XV Congreso de la Sociedad Argentina de Infectología (SADI); 2015

Sociedad Argentina de Infectología

ntroducción: Staphylococcus aureus es un patógeno nosocomial relevante y posee la capacidad de adquirir rápidamente determinantes de resistencia a antimicrobianos. La resistencia a meticilina es comúnmente mediada por laproteína ligadora de penicilina PBP2a, de baja afinidad a β-lactámicos y codificada por el gen mecA o mecC, aunque también existe evidencia de mecanismos alternativos de resistencia a meticilina.Objetivo: Estudiar los mecanismos moleculares implicados en la resistencia a oxacilina (OXA) en una cepa de S. aureus mecA negativa seleccionada intratratamiento.Materiales y Métodos: Se caracterizaron los sucesivos aislamientos de S. aureus recuperados en cuatro episodios de un paciente con bacteriemia en tratamiento con vancomicina y cefazolina. Los primeros tres aislamientos (SAMS) sensibles a OXA y cefoxitina (FOX), y el cuarto aislamiento con resistencia a OXA (SA2).Se realizó la búsqueda de los genes mecA, mecC y lukS/F-PV por PCR. Se estudió la relación clonal entre los cuatro aislamientos por las técnicas de electroforesis de campo pulsado (PFGE), secuenciación de múltiples loci (MLST) y spa typing.Se obtuvieron las secuencias completas del operón bla, el cual contiene los genes que codifican para la β-lactamasa BlaZ y sus reguladores, y de los genes codificantes de PBP2 y PBP4, implicadas en la síntesis de pared celular, delprimer aislamiento SAMS y de SA2. El análisis se realizó utilizando el software Contig Express. Las secuencias de PBP2 de ambos aislamientos fueron comparadas por multialineamiento con otras secuencias de PBP2 disponibles en base dedatos, utilizando ClustalW2 y Espript 3.0, y se construyeron modelos de simulación de PBP2/SA2 asociada a FOX y OXA utilizando Swiss model (http://swissmodel.expasy.org/) y el software Autodock Vina, empleando como templado la estructura cristalográfica de PBP2 de S.aureus (PDB: 2OLV).Resultados: Se determinó que los cuatro aislamientos son isogénicos y corresponden al Secuenciotipo 8, y spa tipo t024. La detección de los genes mecA, mecC, ccr, lukS/F-PV fue negativa.No se encontraron diferencias en las secuencias del operón bla ni en el gen pbp4 entre los aislamientos SAMS y SA2.En cambio, la cepa SA2 presentó una mutación en la posición 1350 del gen pbp2 que resultó en una sustitución de aminoácidos Ala450Asp, cercana al sitio activo de la transpeptidasa. Según el modelado molecular, la sustitución de unaminoácido neutro por uno ácido altera el entorno hidrofóbico existente en esa posición, lo cual impactaría en la organización del sitio activo de la enzima.Conclusiones: La emergencia de la resistencia a OXA en la cepa SA2 seleccionada intratratamiento, podría deberse a la disminución de la afinidad de la transpeptidasa PBP2 por OXA ya que la sustitución Ala450Asp produciría unamodificación en la conformación del sitio activo de esta proteína. No se descarta la coexistencia de otros mecanismos moleculares que contribuyan a la resistencia a este antibiótico.Estos mecanismos alternativos de resistencia a OXA, si bien se presentan con baja frecuencia en el laboratorio clínico, no son detectados cuando se utiliza solamente FOX como marcador de resistencia a meticilina en los ensayos dedifusión en medio sólido, sin embargo es muy importante conocerlos a la hora de instaurar el tratamiento.