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El incremento en la actividad de bombas de eflujo y variaciones en su estructura sería uno de los posibles mecanismos de resistencia a tigeciclina involucrados en S. aureus, especie que ha demostrado la capacidad de desarrollar resistencia frente a la presión selectiva de este antibiótico.El objetivo de este estudio fue evaluar el aporte de la actividad de bombas de eflujo como posible mecanismo de resistencia en mutantes de S. aureus resistentes a tigeciclina seleccionados in vitro y detectar cambios a nivel molecular en las bombas involucradas que expliquen dicho incremento.Se estudiaron dos aislamientos de SARM y sus respectivas mutantes resistentes atigeciclina seleccionadas in vitro (SARTm). La actividad eflujo se evaluó fenotípicamente en las cepas parentales y mutantes resistentes determinando por duplicado la CIM de tigeciclina (TIG) y bromuro de etidio (BE) en presencia y ausencia de inhibidores de bombas de eflujo (reserpina y PAβN) a una concentración de 20 μg/ml. Una CIM ≥ 32 μg/ml para BE sumado a una reducción de la CIM en al menos 4 diluciones en presencia de los inhibidores se consideró indicativo de incremento en la expulsión por bombas de eflujo.Se diseñaron oligonucleótidos específicos para amplificar una región de 1700 pb que codifica para la bomba de eflujo MepA, involucrada en la expulsión de tigeciclina en S. aureus. El producto de PCR se purificó y secuenció. El análisis de las secuencias se realizó mediante el software VECTOR 11.0 y BLAST.Las cepas SARTm mostraron un aumento en la CIM de 128 veces con respecto a la cepa parental y la CIM de BE fue entre 64-128 μg/ml. En presencia de reserpina las 2 mutantes mostraron una disminución ≥ 4 diluciones en la CIM de TIG y BE.La secuencia de nucleótidos de la bomba de eflujo mepA en las cepas parentales mostró 100 % de identidad con la correspondiente secuencia de referencia (S. aureus ST228, Nº acceso HE579073.1). Por el contrario, al comparar la secuencia nucleotídica correspondiente a las dos cepas SARTm con su respectiva cepa parental se observó una transición (C por T) en la posición 211 de la secuencia, lo que generó una mutación con cambio de sentido, Thr29Ile, en la secuencia de aminoácidos traducida. En una de las cepas SARTm se observó además,otra transición (A por G) en la posición 985 de la secuencia nucleotídica de mepA, dando lugar a la mutación Glu287Gly en la secuencia de aminoácidos.Este estudio demuestra la participación de las bombas de eflujo en la resistencia a tigeciclina en S. aureus y describe la presencia de mutaciones en la bomba de eflujo MepA de las cepas mutantes resistentes a TIG. Se deberá evaluar la posible contribución de estas mutaciones al fenotipo de resistencia seleccionado.

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