ß-lactamasas en Morganella morganii

POWER P; RADICE M; BARBERIS C; DE MIER C; MOLLERACH M; MALTAGLIATTI C; VAY C; FAMIGLIETTI A; GUTKIND G

Mar del Plata

Congreso; II Congreso Panamericano de Infecciones Hospitalarias; 1998

Introducción: Morganella morganii es naturalmente resistente a cefalosporinas de primera generación por la producción de una cefalosporinasa cromosómica inducible tipo AmpC. Sin embargo, en nuestra institución son frecuentes los aislamientos con niveles de resistencia a cefalosporinas de tercera generación. Objetivos: caracterizar las enzimas responsables de la resistencia a cefalosporinas de tercera generación en M. morganii Materiales y métodos: se analizaron 29 aislamientos sucesivos de M. morganii procedentes de distintas salas del hospital. Se determinó la susceptibilidad a distintos antibióticos ß-lactámicos y no ß-lactámicos por dilución en medio sólido según NCCLS. Se infirió preliminarmente a la presencia de ß-lactamasas de espectro extendido (BLEE) e inducibilidad por ensayos de doble disco. Se obtuvieron extractos crudos a partir de cultivos de 24 hs. en ausencia y presencia de inductor de ß-lactamasas (cefalotina 30 ug/ml). La actividad de ß-lactamasa fue ensayada por el método de la cefalosporina cromogénica (nitrocefin) y por isoelectroenfoque (IEF) y SDS-PAGE, revelados por el método iodométrico, utilizando como sustratos ampicilina 500 g/ml y ceftriaxona 1.000 g/ml. La caracterización de la BLEE se complementó con estudios de secuenciación parcial y perfiles de restricción de los fragmentos amplificados por PCR, utilizando primers específicos. Resultados: diez cepas (grupo 1) altamente susceptibles a ceftriaxona (CIM 0.032 g/ml) sólo hidrolizaron nitrocefin luego de la inducción con cefalotina, pero no revelaron bandas por IEF y SDS-PAGE. Otras 13 cepas (grupo 3), cuyos valores de CIM para ceftriaxona fueron menores a los puntos de corte propuestos por NCCLS, pero claramente mayores que el primer grupo, demostraron la presencia de dos enzimas activas frente a ampicilina de puntos isoeléctricos (pI) aparentes de 5,4 y 7,4, ésta última sólo detectable en extractos obtenidos luego de la inducción. Los pesos moleculares, estimados por SDS-PAGE, fueron de 23.000 y 36.000 respectivamente. Las 6 cepas restantes (grupo 2), cuyas CIMs para ceftriaxona fueron mayores a 64 g/ml, mostraron la presencia de dos ß-lactamasas con pI aparentes de 5,4 y 8,2, utilizando ampicilina como sustrato revelados; ambas inhibibles por clavulanato y sulbactam, pero no por EDTA, y con peso molecular aparente de 23.000. La enzima de pI 8,2 fue también activa sobre ceftriaxona, y fue identificada como una CTX-M-derivada por PCR, perfiles de restricción y secuenciación parcial. Conclusión: la prueba de doble disco para detectar la inducibilidad no resultó homogéneamente sensible. El test de sinergia alertó sobre la probable presencia de una ß-lactamasa de espectro extendido, que luego se confirmó como CTX-M-derivada, constituyendo la primera descripción en M. morganii.