INVESTIGADORES
MOLLERACH Marta Eugenia
congresos y reuniones científicas
Título:
Estudio de la región promotora del gen galU de Streptococcus pneumoniae
Autor/es:
BONOFIGLIO L; GARCÍA E; MOLLERACH M
Lugar:
Rosario, Argentina
Reunión:
Jornada; XIII Jornadas Argentinas de Microbiología; 2008
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Microbiología
Resumen:
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La emergencia
mundial de cepas multiresistentes de S.
pneumoniae y el hecho de no contar con una vacuna conjugada que incluya los
serotipos prevalentes en nuestro país han generado la necesidad de disponer de
nuevas alternativas terapéuticas para el tratamiento de las enfermedades
producidas por neumococo. El gen galU
codifica una UDP-glucosa pirofosforilasa (UDPG:PP, GalU) imprescindible para la
biosíntesis de la cápsula. Esta enzima es estructural y evolutivamente
diferente de las pirofosforilasas eucarióticas y puede proporcionar un
interesante blanco molecular para el diseño de futuras drogas antibacterianas.
Resultados previos daban cuenta de la caracterización bioquímica y
fisicoquímica de la enzima GalU. El diseño de futuras drogas antibacterianas
que tengan como blanco a la enzima GalU requiere además elucidar los mecanismos
de expresión de esta enzima. El objetivo de este trabajo fue estudiar la región
promotora y la expresión del gen galU.
Se realizó la búsqueda in silico de
la posible región promotora y la clonación de esa región en un vector para la
detección de promotores por medio de la expresión de la enzima autolítica
mayoritatia de neumococo, LytA. Con esas construcciones se realizaron
experimentos de RT-PCR, curvas de crecimiento y ensayos de degradación de
paredes radiactivas. La expresión del gen galU
fue estudiada en S. pneumoniae R6
realizando curvas de crecimiento a 37 ºC y analizando la abundancia de
transcriptos específicos mediante RT-PCR semicuantitativa en tiempo real en
distintas fases de la curva de crecimiento. Los resultados obtenidos mediante
actividad lítica con paredes de neumococo marcadas, curvas de crecimiento y
RT-PCR permitieron confirmar la región promotora hallada in silico. La misma contiene un promotor de tipo ´-10 extendido
que transcribe al gen galU y al gen gpsA ubicado corriente arriba del mismo.
Además se comprobó que el gen galU se
expresa preferentemente en fase exponencial. Estos resultados representan un
aporte al conocimiento de la enzima GalU, imprescindible para la biosíntesis
del polisacárido capsular y son el punto de partida a una mayor comprensión de
los mecanismos de expresión de la misma.
