Nuevo mecanismo de resistencia a antibióticos beta-lactámicos en Enterococcus hirae.

MASSA R; AYALA J; MOLLERACH M; IACONO R; LABOWSKI V; GUTKIND G

Buenos Aires

Congreso; XVII Congreso Latinoamericano de Microbiología. X Congreso Argentino de Microbiología.; 2004

Asociación Argentina de Microbiología

En trabajos previos, ha sido demostrado que un aislamiento de Enterococcus hirae con susceptibilidad disminuida a los b-lactámicos, obtenido post-tratamiento con ampicilina (EHR), no expresa mayor cantidad de la PBP multifuncional y de baja afinidad (PBP 5) con respecto al aislamiento recuperado previamente al tratamiento con dicho antibiótico (EHS). En este aislamiento tampoco fue detectada la presencia de PBP 3r. Estos resultados fueron corroborados por Western blot utilizando anticuerpos anti-PBP 5 y anti-PBP 3r. En EHR no hay disminución de la afinidad por  penicilina en ninguna de las PBPs. Los ensayos de unión a otros b-lactámicos revelaron que PBP4 de EHR posee mayor afinidad por cefoperazona, imipenem y piperacilina comparada con la proteina homóloga EHS, junto con mayor cantidad del producto de proteólisis de PBP4 para EHR, lo cual implicaría que a mayor inactivación de PBP4 mayor resistencia a b-lactámicos. EHR no es productor de beta-lactamasas. El objetivo de este trabajo es intentar establecer el mecanismo de resistencia a los antibióticos beta-lactámicos seleccionado in vivo en el aislamiento clínico EHR. El gen pbp5 ha sido secuenciado en EHR y EHS y presenta un 99.7% de identidad en su secuencia nucleotídica. En la secuencia traducida, cinco de los seis cambios de aminoácidos se encuentran en el módulo que no une penicilina, pero no localizados en el fragmento (E46-D160), cuya presencia está asociada al correcto plegamiento de la enzima para poder unir penicilina. El cambio detectado en el módulo que une penicilina tampoco se encuentra en una región previamente descripta como modificadora de la afinidad por los beta-lactámicos. Estos datos permiten asumir que no hay modificación de la afinidad en esta PBP. En presencia de 16 mg/ml de penicilina, EHR, tiene una velocidad de muerte menor que EHS. Además, el comportamiento de las suspensiones de los dos aislamientos en buffer fosfato, en presencia de ácido lipoteicoico y ácido oleico, sugeriría una menor actividad autolítica en EHR con respecto a EHS. El análisis por microscopía electrónica de la ultraestructura de células de EHR y EHS, en presencia de 1 y 8 mg/ml de penicilina, permitió detectar un aparente engrosamiento de la pared celular de EHR, sin otro tipo de alteración morfológica. La abundancia relativa de los muropéptidos (monómero pentapéptido y posiblemente del dímero tri-tetrapeptido) detectados por HPLC y analizados por espectrometría de masa y en su composición química, sugieren menor actividad carboxipeptidasa en EHR, y el posible reemplazo de la actividad DD-transpeptidasa por una LD-transpeptidasa insensible a los b-lactámicos. La disminución de la susceptibilidad seleccionada in vivo parece ser diferente al mecanismo descripto por una selección in vitro. En este caso estaría asociada a modificaciones en el peptidoglicano, sumado a la proteólisis aumentada de PBP4, como un aumento de enzima inhibible que puede contribuir en el aumento de la CIM, de manera similar al "secuestro" de vancomicina por aumento de los blancos en la pared de los estafilococos.