Determinación de vitamina B12 en muestras de interés nutricional por cromatografía líquida de alta eficiencia previa microextracción basada en un líquido iónico hidrosoluble

BERTON, PAULA; MARTINEZ, LUIS D.; WUILLOUD, RODOLFO G.

Santa Fe

Congreso; VI CONGRESO ARGENTINO DE QUIMICA ANALITICA; 2011

Asociación Argentina de Químicos Analíticos

La ingesta dietética recomendada (RDA) de vitamina B12 es entre 0,4 y 2,8 µg, dependiendo del sexo y la edad. Esta vitamina se encuentra sólo en productos de origen animal, mientras que en el reino vegetal su presencia es casi nula [1]. Es por esto que los vegetarianos estrictos presentan carencia o déficit de este nutriente, necesitando complementar su dieta con suplementos vitamínicos o consumir alimentos suplementados con vitamina B12 [2]. A pesar de que existen numerosos métodos disponibles para la determinación de esta vitamina, al mismo tiempo suelen ser laboriosos, tediosos, inespecíficos, poco seguros o demasiado caros y con baja sensibilidad [3]. En los últimos años, los líquidos iónicos (ILs) se han utilizado ampliamente como posibles reemplazos de los solventes orgánicos volátiles tradicionales, ya que tienen puntos de fusión extremadamente bajos, alta estabilidad térmica y viscosidades relativamente altas [4]. Sin embargo, la elevada viscosidad puede promover la desnaturalización de biomacromoléculas durante la extracción/separación usando simplemente los sistemas bifásicos IL/agua. Una nueva clase de técnica de extracción basada en un sistema bifásico acuoso (ATPS) compuesto por un IL soluble en agua y sales, ha sido propuesta recientemente para la recuperación y purificación de varias biomoléculas [5]. En el presente trabajo se presenta una novedosa y simple técnica de extracción basada en ATPS, utilizando el IL hidrofílico cloruro de 1-hexil-3-metilimidazolio ([C6mim]Cl) y la sal K2HPO4 para la extracción y separación de vitamina B12. Este método simplifica y agiliza la etapa de extracción/preconcentración, seguido por la inyección directa de la fase rica en IL en el cromatógrafo líquido de alta eficiencia (HPLC) y detección UV-Visible (λ=360) para la rápida determinación de vitamina B12. Los parámetros que pueden influir en el sistema de extracción y en la determinación por cromatografía fueron optimizados, permitiendo así la determinación de la vitamina en presencia de la matriz de IL. El método fue aplicado satisfactoriamente al análisis de vitamina B12 en muestras de interés nutricional, como bebidas fortificadas y suplementos nutricionales. Bajo condiciones óptimas, la eficiencia de extracción fue mayor de un 90% en todas las muestras analizadas, con límites de detección de 0,3 µg/mL, desviación estándar relativa (RSD) menores de 2,9% (n = 10), e intervalo lineal de 1?200 µg/mL. La técnica propuesta puede considerarse como un potencial sistema de extracción de vitaminas solubles en agua, rápido y con mínimo consumo de solventes; características que favorecen su directa aplicación en laboratorios de análisis de rutina. [1] A.G. Hernandez, Tratado de Nutrición. Tomo III: Nutrición Humana en el Estado de Salud, 2nd ed. Editorial Medica Panamericana SA, Madrid, 2010. [2] W.J. Craig, Nutr. Clin. Pract., 25 (2010) 613. [3] S.S. Kumar, R.S. Chouhan, M.S. Thakur, Anal. Biochem., 398 (2010) 139. [4] C.F. Poole, S.K. Poole, J. Chromatogr. A, 1217 (2010) 2268. [5] Z. Li, Y. Pei, H. Wang, J. Fan, J. Wang, TrAC-Trend. Anal. Chem., 29 (2010) 1336.