Informe de Avance, Asistencia Financiera INC

ALEJANDRO J. URTREGER; LAURA B. TODARO

2014-03-04/2016-02-28

Biológica

Salud humana

La proteína quinasa CK2 es una serina/treonina quinasa involucrada en crecimiento celular, supervivencia y apoptosis. El CIGB-300 es un péptido sintético capaz de unirse al dominio fosfoaceptor de algunos sustratos de CK2 inhibiendo su actividad.Previamente determinamos que CIGB-300 presenta para las células de pulmón humanas NCI-H125, una IC50 de 119±2,4 uM e induce apoptosis conjuntamente con la activación de caspasas y la disminución de c-Myc y Ciclinas D1 y D2.En este trabajo nos propusimos evaluar el efecto del tratamiento con CIGB-300, sobre el crecimiento celular en 3D y la modulación de vías de señalización, reguladas por CK2, implicadas en progresión tumoral.Hemos logrado desarrollar esferoides estables de células NCI-H125, que fueron capaces de crecer y mantenerse en cultivo durante al menos 14 días. El tratamiento de estos cultivos 3D con CIGB-300 indujo una significativa inhibición en su crecimiento luego de 5 días, utilizando una dosis equivalente a IC25 y IC50. A partir del sexto día de tratamiento el tamaño de los esferoides se redujo drásticamente, retornando el día 8 al volumen inicial.A fin de analizar el efecto del CIGB-300 sobre la vía Wnt, se incubaron las células NCI-H125 con medio condicionado conteniendo el factor Wnt3a, lo que provocó un importante aumento de beta-catenina citosólica. Mediante WB pudimos determinar que el tratamiento con CIGB-300 fue capaz de bloquear dicho aumento confirmando su rol en la modulación de la vía de Wnt, altamente involucrada en proliferación celular.A fin de analizar la vía dependiente de NFkB, la misma se activo por tratamiento con el éster de forbol PMA (15 nM, 24 h). El tratamiento con CIGB-300 no fue capaz de modular esta vía de señalización intracelular, involucrada en supervivencia, según se determinó mediante ensayos de WB y expresión de genes reporteros.Podemos concluir que el CIGB-300 no sólo induce una importante respuesta anti-proliferativa en el modelo tridimensional, que se asemeja a las condiciones de un tumor in vivo sino que además afecta vías de señalización claves en la progresión tumoral. Estos resultados sugieren que esta droga podría tener utilidad para el abordaje terapéutico del cáncer de pulmón.