Tratamiento de células cáncer de pulmón con el péptido sintético CIGB-300: implicancias de la inhibición de la vía NF-kB.

STÉFANO M. CIRIGLIANO; MARIA I. DIAZ BESSONE; CAROLINA FLUMIAN; DAMIAN E. BERARDI; ELISA D. BAL DE KIER JOFFE; LAURA B. TODARO; ALEJANDRO J. URTREGER

Buenos Aires

Congreso; XXX Jornadas de Oncología; 2015

Instituto de Oncología "A. H. Roffo"

Objetivos: La proteína quinasa CK2 es una serina/treonina quinasa involucrada en crecimiento celular, supervivencia y apoptosis. El CIGB-300 es un péptido sintético capaz de unirse al dominio fosfoaceptor de varios sustratos de CK2 e inhibir la actividad de la enzima. El péptido CIGB-300 ha demostrado actividad antitumoral y este efecto estaría mediado, al menos en parte, por su alta eficacia en la inhibición de la vía de supervivencia dependiente del factor nuclear kB (NF-kB). Además se sabe que dicha vía de señalización se encuentra estrechamente asociada a quimiorresistencia. En este contexto nos proponemos: Evaluar el estado de activación de la vía de NF-kB luego del tratamiento con cisplatino en células de cáncer de pulmón no pequeñas (NSCLC). Estudiar el efecto del tratamiento combinado de CIGB-300 y cisplatino sobre la vía canónica de NF-kB. Generar in vitro un modelo de NSCLC quimiorresistente al cisplatino, con el fin de evaluar si el CIGB-300 es capaz de inducir sensibilización a dicho tratamiento. Materiales y métodos: Líneas celulares: NCI-H125, adenocarcinoma humano de pulmón de células no pequeñas y A549, células humanas de epitelio alveolar basal. Tratamientos: monocapas subconfluentes de NCI-H125 fueron incubadas o no durante tiempos menores a una hora con CIGB-300 (25uM) y/o cisplatino (1uM). Como control positivo de activación de la vía de NF-kB se utilizó el éster de forbol PMA (16nM). Para la generación de una línea quimiorresistente, las células A549 fueron tratadas con la concentración inhibitoria 50 (IC50) de cisplatino por 72h una vez por semana durante seis meses. Se mantuvo en paralelo la misma línea sin tratamiento. La separación de fracciones nucleares y citoplasmáticas se realizó acorde al protocolo del proveedor (Abcam). Por Western Blot (WB) se evaluaron los niveles nucleares y citoplasmáticos de la subunidad p65 de NF-kB luego de los diferentes tratamientos. Ensayo de proliferación celular: El efecto del cisplatino y/o CIGB-300 sobre las distintas líneas celulares se evaluó por MTS, cristal violeta o recuento directo. Resultados: Previamente hemos determinado que CIGB-300 induce apoptosis a través de la activación de Caspasa-3. Más aún, el péptido también indujo la reversión de algunas características asociadas con el fenotipo maligno como la migración celular, la invasión y la secreción de enzimas proteolíticas. Respecto a la vía de supervivencia NF-kB, observamos por WB que tratamientos cortos con CIGB-300 redujeron los niveles nucleares de la subunidad p65, necesaria para la señalización de esta vía, aún en presencia del estímulo activador PMA. Por el contrario, el tratamiento con cisplatino indujo la acumulación de p65 en el núcleo. Al tratar las células con la combinación de cisplatino y CIGB-300 pudimos determinar que traslocación de p65 al núcleo fue completamente abolida, mostrando que el efecto de CIGB-300 prevalece por sobre el del cisplatino. Con el fin de indagar la posible implicancia terapéutica de la inhibición de la vía de NF-kB, se generó un modelo de células quimiorresistentes al tratamiento con cisplatino. Luego de tratar periódicamente la línea A549 durante seis meses, se corroboró por MTS y recuento directo que la supervivencia de estas células al tratamiento con cisplatino (5uM, 72h) fue un 40% mayor respecto a las células control. Conclusiones: Nuestros resultados indican que CIGB-300 es capaz de modular negativamente varias características asociadas con la progresión maligna. La inhibición de la vía canónica de NF-kB aún en combinación con cisplatino, nos conduce a explorar su efectividad en un esquema de quimioresistencia y permite el acercamiento a un posible futuro tratamiento para cáncer de pulmón.