Efectos de la activación de los receptores retinoicos sobre la invasión celular y el mantenimiento de las células stem/progenitoras en líneas celulares de cáncer mamario murino

CAROLINA FLUMIAN; STÉFANO M. CIRIGLIANO; MARIA I. DIAZ BESSONE; DAMIAN E. BERARDI; AGUSTINA TARUSELLI; ELISA D. BAL DE KIER JOFFE; ALEJANDRO J. URTREGER; LAURA B. TODARO

Buenos Aires

Congreso; XXX Jornadas de Oncología; 2015

Objetivo: Recientemente, hemos descripto que el tratamiento con retinoides produce efectos contrapuestos en diversos procesos in vitro involucrados en la diseminación metastásica. Como modelo hemos utilizado las líneas celulares de cáncer de mama triple negativo LM38-LP y 4T1 que difieren en el patrón de expresión de los receptores de ácido retinoico (RARs). Hemos observado que la activación de RAR alfa provoca un aumento en la migración y en la secreción de MMPs en la línea 4T1, mientras que la activación de RAR beta aumenta la adhesión celular. Sin embargo, en las células LM38-LP la activación de RAR alfa provoca tanto la disminución de la migración, como la secreción de MMPs y la adhesión. En el presente trabajo nos propusimos evaluar cómo la activación de los distintos isotipos de RARs influye en el proceso de invasión y en el mantenimiento del componente stem/progenitor, factores críticos en la diseminación metastásica. Finalmente se evaluó el efecto in vivo de los agonistas específicos de RARs, mediante un ensayo de metástasis experimentales. Materiales y Métodos: Se utilizaron los siguientes agonistas: ATRA (pan-agonista), AM580 (agonista RAR alfa), AC (agonista RAR beta), BMS (agonista RAR gama). Ensayo de Invasión: las células LM38-LP y 4T1 pre-tratadas por 96 hs con los agonistas o vehículo (DMSO), fueron sembradas sobre cámaras transwells (membrana con poro de 8um conteniendo Matrigel). Luego de 16hs para las LM38-LP y 8hs para las 4T1, se contabilizaron bajo microscopio las células que atravesaron la membrana, previa fijación y tinción de sus núcleos con DAPI. Formación de mamosferas primarias: células LM38-LP pre-tratadas con los distintos retinoides por 144hs, fueron sembradas en baja densidad sobre placas de cultivo de baja adhesión, en medio de cultivo DMEM en ausencia de suero y en presencia de B27, EGF (20ng/ul). Se contabilizaron las mamosferas formadas luego de 7 días. Ensayo de metástasis experimentales: células pre-tratadas con los distintos retinoides por 144hs, se inyectaron en la vena de la cola de ratones Balb/c. Luego de 21 días se sacrificaron los ratones y se contabilizo el número de nódulos pulmonares. Resultados: Tanto el tratamiento con ATRA como con AM580 disminuyeron la invasión de las células LM38-LP mientras que los mismos tratamientos mostraron un aumento de la capacidad invasora de las células 4T1. Por otro lado, para la línea LM38-LP pudimos observar que sólo los pre-tratamientos con AM580 o AC produjeron un aumento en el número de mamosferas. Con respecto al ensayo de metástasis experimentales observamos que el pre-tratamiento de las células con AM580 o AC mostró un aumento en el número de nódulos pulmonares para las células LM38-LP mientras que en las células 4T1 fue el pre-tratamiento con BMS el que produjo un aumento de las metástasis. Conclusiones: La capacidad invasora sería dependiente de la actividad de RAR alfa. En este sentido, el potencial invasor disminuye en las células LM38-LP mientras que aumenta en las células 4T1. Este resultado concuerda con nuestras observaciones previas en las que la activación de este isotipo también disminuía otros parámetros in vitro asociados con la diseminación metastasica para las LM38-LP, mientras que los aumentaba en la línea 4T1. El aumento del potencial metastásico observado en las células LM38-LP podría asociarse con el incremento en el número de mamosferas primarias, inducido por la activación de RAR alfa y/o RAR beta. Ambos isotipos estarían involucrados en el enriquecimiento o conservación del componente stem, pudiendo ser los responsables del desarrollo de las metástasis.