Efectos biologicos de la sobreexpresion de PKCd (delta) en una linea de carcinoma ductal pancreatico humana (panc1)

VALERIA C. GROSSONI; LAURA V. MAURO; ALEJANDRO J. URTREGER; ELISA D. BAL DE KIER JOFFE; LYDIA I. PURICELLI

Buenos Aires

Congreso; XXI Jornadas Multidisciplinarias de Oncologia; 2005

Instituto de Oncología "A. H. Roffo"

El cáncer de páncreas no responde a los tratamientos convencionales. Sólo los avances en la biología molecular ayudarán a entender la patogénesis de esta enfermedad. Así, miembros de la familia de serino/treonina quinasas PKC, receptores de los esteres de forbol, han sido involucrados en el control de la proliferación, diferenciación y progresión de estos tumores. Se conoce poco sobre el papel de la PKCd en la progresión maligna del cáncer de páncreas, aunque se sabe que es pro-apoptótica en otros modelos tumorales. El objetivo del presente trabajo fue sobreexpresar la isoforma novel d de PKC en la línea de carcinoma pancreático humano PANC-1 mediante el uso de vectores específicos (pMTH-PKCd) y analizar algunas propiedades in vitro de estas células, asociadas con el comportamiento tumoral. Células transfectadas con el vector vacío pMTH se utilizaron como control. En primera instancia se determinó, mediante Western blot e inmunohistoquímica, que las células PANC-1 expresaron en forma constitutiva niveles elevados de PKC a, b y z y muy bajos de PKCd. Se obtuvieron clones transfectados en forma estable con pMTH- PKCd que mostraron altos niveles de la quinasa, los cuales fueron agrupados para eliminar la variabilidad clonal individual. No se encontraron diferencias en la tasa de crecimiento in vitro de las células transfectadas con PKCd y las controles, cuando las células crecieron en monocapas adheridas a sustrato plástico. Sin embargo, cuando las células se hicieron crecer en forma independiente del anclaje en agar blando, la sobreexpresión de PKCd indujo un aumento en el número de colonias. Además, la transfección con PKCd produjo un cambio sustancial en la disposición del citoesqueleto de actina, observándose una marcada disminución de las fibras de stress y un gran predominio de actina cortical. También, PKCd indujo un aumento significativo en la capacidad adhesiva de las células PANC-1. En conclusión nuestros resultados demuestran que la sobreexpresión de PKCd induce diferentes cambios biológicos en las células tumorales PANC-1. En particular las modificaciones en la organización del citoesqueleto de actina serían compatibles con un fenotipo menos transformado.