Vías de señalización involucradas en la resistencia a la apoptosis inducida por derivados de la doxorubicina (Dox). Rol de la Proteína Quinasa C delta (PKCd)

MARÍA INÉS DÍAZ BESSONE; DAMIAN E. BERARDI; PAOLA B. CAMPODÓNICO; ELISA D. BAL DE KIER JOFFÉ; LAURA B. TODARO; ALEJANDRO J. URTREGER

Mar del Plata

Congreso; 55° Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2010

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)

En este trabajo nos propusimos estudiar si la sobreexpresión de PKCd en células mamarias murinas es capaz de alterar la susceptibilidad a la muerte celular inducida por dos quimioterápicos derivados de la Dox (AD198 y AD288), y evaluar las vías de señalización implicadas en este proceso. El mecanismo de acción del AD288 involucra la generación de daño en el ADN, mientras que el AD198 induciría apoptosis por activación de PKCd. Mediante western blot determinamos que las células NMuMG-PKCd presentan un aumento en los niveles de expresión y/o activación de distintas moléculas y vías involucradas en sobrevida como Bcl-2, pBad, PI3K/Akt y NFkB. Al mismo tiempo, la sobreexpresión de PKCd generó una evidente resistencia a la citotoxicidad inducida por ambos ADs (sobrevida: AD198, 80±10% vs. 41±8% y AD288, 90±15% vs. 60±10% en NMuMG-PKCd y NMuMG-vector respectivamente). A fin de evaluar el rol de la vía PI3K/Akt en la resistencia a la muerte inducida por los dos ADs, las células se trataron con LY294002, inhibidor de PI3K. La inhibición de esta vía en las células NMuMG-PKCd triplicó el efecto citotóxico del AD198, mientras que no alteró la susceptibilidad a la muerte inducida por AD288 (LD50 AD198 3.1±0.9 uM vs LD50 AD288 15.6±1.3 uM, p<0,05). Se observó un efecto similar en las células transfectadas con el vector vacío. El rol de la vía de NFkB en la resistencia a la muerte inducida por los dos ADs se determinó mediante la transfección transitoria con una variante de su represor IkB. La inhibición de esta vía incrementó significativamente la susceptibilidad a la muerte celular inducida por ambas drogas (LD50 AD198: 1.24±0.09 uM y LD50 AD288: 5.78± 0.6 uM). En este trabajo demostramos que las señales antiapoptóticas generadas por PKCd, en las células mamarias murinas normales NMuMG pueden revertirse inhibiendo las vías de sobrevida PI3K/Akt y/o NFkB, dependiendo en parte del mecanismo de acción de la droga citotóxica utilizada.