Vías de señalización involucradas en la resistencia a la muerte celular inducida por la la Proteina Quinasa C delta (PKCd) en células mamarias murinas

MARÍA INÉS DÍAZ BESSONE; DAMIAN E. BERARDI; ELISA D. BAL DE KIER JOFFÉ; PAOLA B. CAMPODÓNICO; LAURA B. TODARO; ALEJANDRO J. URTREGER

Buenos Aires

Congreso; XXVI Jornadas de Oncología; 2010

Instituto de Oncología "Angel H. Roffo"

En trabajos previos demostramos que, la sobreexpresión de PKCd incrementa la proliferación y sobrevida de células mamarias murinas NMuMG. En este trabajo nos propusimos estudiar las vías de señalización intracelular involucradas en la resistencia al efecto citotóxico inducido por AD198 y AD288, dos quimioterápicos derivados de la doxorrubicina (Doxo). Al igual que la Doxo, el mecanismo de acción del AD288 involucra la generación de daño en el ADN y la inhibición de la topoisomerasa II, mientras que el AD198 carece de estas propiedades y se ha propuesto que induce apoptosis por activación de PKCd. El tratamiento con 5 a 10 uM de ambas drogas confirmó que la sobreexpresión de PKCd incrementa la resistencia a la apoptosis inducida por ambas drogas (sobrevida: AD198, 80±10% vs. 41±8% y AD288, 90±15% vs. 60±10% para NMuMG-PKCd y células control respectivamente). Mediante Western blot pudimos determinar que PKCd indujo un incremento en los niveles de expresión de Bcl-2 y de fosforilación de Bad, además de activar las vías de PI3K/Akt y NF-kB, todas ellas moléculas involucradas en sobrevida celular. A fin de evaluar el rol de la vía PI3K/Akt en la resistencia a la muerte inducida por los dos ADs, las células se trataron con el inhibidor de PI3K, LY294002. La inhibición de esta vía incrementó el efecto citotóxico del AD198 desapareciendo las diferencias de sensibilidad entre las células NMuMG-PKCd y las células control. Por el contrario, la inhibición de esta vía no alteró la susceptibilidad a la muerte inducida por el AD288. Finalmente analizamos el rol de la vía de NF-kB en la resistencia a la muerte inducida por los dos ADs. Para inhibir la actividad NF-kB se empleó la transfección transitoria con una variante de su represor IkB. La inhibición de esta vía incrementó significativamente la susceptibilidad a la muerte celular inducida por ambas drogas (90% aprox. para AD198 y 50% aprox. para AD288 en células NMuMG-PKCd y NMuMG-vector). En este trabajo demostramos que las señales antiapoptóticas generadas, en las células mamarias murinas normales NMuMG, por PKCd pueden revertirse inhibiendo las vías de sobrevida dependientes de Akt y/o NF-kB, dependiendo del mecanismo de acción de la droga citotóxica utilizada.