La inhibición de la proteína quinasa CK2 por el péptido CIGB-300 afecta el crecimiento tridimensional y la vía de señalización dependiente de Wnt en células tumorales pulmonares humanas

STÉFANO M. CIRIGLIANO; MARÍA INÉS DÍAZ BESSONE; CAROLINA FLUMIAN; DAMIAN E. BERARDI; ELISA D. BAL DE KIER JOFFE; HERNÁN FARINA; LAURA B. TODARO; ALEJANDRO J. URTREGER

Mar del Plata

Simposio; 58° Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2013

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)

La proteína quinasa CK2 es una serina/treonina quinasa involucrada en crecimiento celular, supervivencia y apoptosis. El CIGB-300 es un péptido sintético desarrollado por el Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología de La Habana, capaz de unirse al dominio fosfoaceptor de varios de los sustratos de CK2 inhibiendo su actividad. Previamente determinamos que CIGB-300 presenta una concentración inhibitoria (IC50) de 119±2,4 uM para las células de pulmón humanas NCI-H125. A su vez hemos corroborado por inmunofluorescencia con Anexina V-FITC que tratamientos cortos (60 min) con CIGB-300 inducen apoptosis en las células NCI-H125, en niveles comparables con otros inductores conocidos como el Etopósido. En forma concomitante con la apoptosis, observamos por Western Blot (WB) la activación de caspasas, y la disminución en la expresión de C-myc y las ciclinas D1 y D2. En este trabajo nos propusimos evaluar el efecto del tratamiento con CIGB-300, sobre el crecimiento celular en tres dimensiones y la modulación de vías de señalización, reguladas por CK2, implicadas en progresión tumoral. En primera instancia, logramos desarrollar esferoides estables de células NCI-H125, que fueron capaces de crecer y mantenerse en cultivo durante al menos 14 días. El tratamiento de estos cultivos 3D con CIGB-300 indujo una significativa inhibición en su crecimiento luego de 5 días, utilizando una dosis equivalente a 1/2 y 1 IC50 (volumen promedio: 4,07x107±0,70x107 um3 vs 3,23x107±0,26x107 um3 y 2,13x107±0,35x107 um3 para 1/2 y 1 IC50 respectivamente). A partir del sexto día de tratamiento el tamaño de los esferoides se redujo drásticamente, retornando el día 8 al volumen inicial. A fin de analizar el efecto del CIGB-300 sobre la vía Wnt, la misma se activó en mediante la incubación de las células NCI-H125 con medio condicionado conteniendo el factor Wnt3a. Esta incubación indujo un importante incremento en los niveles citoplasmáticos de beta-catenina. Mediante WB pudimos determinar que el tratamiento con CIGB-300 fue capaz de bloquear dicho aumento confirmando su rol en la modulación de la vía de Wnt, altamente involucrada en proliferación celular. A fin de analizar la vía dependiente de NFkB, la misma se activó por tratamiento con el éster de forbol PMA (15 nM, durante 24 hs). El tratamiento con CIGB-300 no fue capaz de modular esta vía de señalización intracelular, involucrada en supervivencia, según se determinó mediante ensayos de WB y expresión de genes reporteros. Podemos concluir que el CIGB-300 no sólo induce una importante respuesta anti-proliferativa en el modelo tridimensional, que se asemeja a las condiciones de un tumor in vivo sino que además afecta vías de señalización claves en la progresión tumoral. Estos resultados sugieren que esta droga podría tener utilidad para el abordaje terapéutico del cáncer de pulmón.